Resumen de Implicacion de la quinasa gsk3 en la regulacion de la supervivencia inducida por el receptor de qiomioquinas ccr7 en las células dendríticas
INTRODUCCIÓN A.
Apoptosis A.1 Características generales 7 A.2 Caspasas 8 A.3 Proteínas de la familia Bcl-2 8 A.4 Apoptosis extrínseca e intrínseca 9 B.
Las Células Dendríticas B.1 Sistema inmune y respuesta inmunológica 10 B.2 Función inmunológica y ciclo biológico 12 B.3 Apoptosis en las células dendríticas; relevancia en la función inmunológica 13 C.
Quimioquinas y sus receptores C.1 Quimioquinas 14 C.2 Receptores de quimioquinas 15 C.3 Proteínas G heterotriméricas 16 D.
El receptor de quimioquinas CCR7 y sus ligandos, CCL19 y CCL21 D.1 Las quimioquinas CCL19 y CCL21 18 D.2 El receptor de quimioquinas CCR7 19 D.3 Funciones reguladas por CCR7 en CDs y vías de señalización implicadas 19 E.
Mecanismos moleculares implicados en la regulación de la supervivencia celular E.1 PI3K 20 E.2 Akt 21 E.3 NF-¿B 22 E.4 FOXO 24 E.5 GSK3 25 1 ÍNDICE OBJETIVOS 29 MATERIALES Y MÉTODOS Reactivos generales 33 Animales 34 Cultivos celulares 1.
CDs humanas derivadas de monocitos 34 2.
CDs murinas de bazo 34 3.
Cultivo de células Jurkat 35 Western Blot 35 Inmunoprecipitación 35 Fraccionamiento nuclear 36 Valoración de proteína 36 Inmunocitoquímica 36 Microscopía de fluorescencia y confocal 36 Citometría de flujo 37 Vectores de expresión, siRNAs y nucleofecciones 37 Ensayos de apoptosis 1.
Tinción con Hoechst 33342 38 2.
Tinción con Anexina V-Fitc / IP 38 3.
Tinción con DePsipher 38 Ensayo de apoptosis de CDs in vivo 1.
Inyección de CDs en ratones C57BL/6, extracción y procesamiento de los ganglios poplíteos 39 2.
Microscopía multifotón y análisis de las CDs apoptóticas en los ganglios linfáticos 39 Análisis estadístico 40 RESULTADOS A.
GSK3 es una molécula pro-apoptótica en CDs A.1 GSK3 es una molécula pro-apoptótica en CDs humanas in vitro 43 A.2 GSK3ß es la principal isoforma reguladora de la supervivencia en CDs 45 2 ÍNDICE A.3 GSK3 es pro-apoptótica en CDs murinas tanto in vitro como in vivo 47 B.
CCR7 regula negativamente moléculas pro-apoptóticas como GSK3ß y FOXO B.1 CCR7 inhibe la actividad de GSK3ß sin afectar a su localización 49 B.2 CCR7 inhibe la actividad de FOXO1/3 regulando su estado de fosforilación y su localización 51 C.
CCR7 inhibe GSK3ß a través de la vía de PI3K/Akt1 que regula la supervivencia de las CDs C.1 CCR7 regula la actividad de GSK3ß mediante una vía que implica la activación de G¿i/ß¿/PI3K/Akt1 53 C.2 La inhibición de GSK3ß inducida por CCR7 es independiente de los módulos que regulan la quimiotaxis y la velocidad de las CDs 56 C.3 PKC está implicada en la inhibición de GSK3ß inducida por CCR7 58 C.4 GSK3ß no afecta a la fosforilación de Akt1 ni ERK1/2 inducida por CCR7, ni altera la expresión de CCR7 en la membrana 59 D.
CCR7 regula la expresión de miembros de la familia Bcl-2 60 E.
GSK3ß regula la vía de NF-¿B en CDs E.1 La inhibición de GSK3 altera la localización de NF-¿B regulando el nivel de I¿B 62 E.2 Los inhibidores de GSK3 producen un aumento en la expresión de Bcl-XL 66 F.
GSK3 no regula ß-catenina en CDs 67 G.
GSK3ß regula la actividad de FOXO en CDs G.1 La actividad de GSK3ß regula la localización de FOXO1/3 en CDs 69 G.2 La inhibición de GSK3 produce una disminución en la expresión de Bim 72 G.3 GSK3ß y FOXO3 interaccionan en CDs 73 3 ÍNDICE H.
GSK3ß activa antagoniza el efecto pro-supervivencia de Akt1 y su inhibición es necesaria para la inducción de supervivencia por CCR7 75
