Nuevas aplicaciones de la cromatografia de afinidad rapida a la separacion de enzimas
- Autores: José Alhama Carmona
- Lectura: En la Universidad de Córdoba (ESP) ( España ) en 1992
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Manuel Tena Aldave (presid.), José Manuel Roldán Nogueras (secret.), José María Vega Piqueres (voc.), Miguel Valcárcel Cases (voc.), Manuel López Pérez (voc.)
- Materias:
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- Resumen
Se ha empleado la cromatografia de afinidad de alta presion (hplac) para la purificacion y cuantificacion de distintas enzimas, utilizando columnas preempaquetadas con un gramo de silice activada con grupos epoxido, como soporte para la union de los ligandos de afinidad. una columna se derivatizo con un analogo del nadp+ (ahc8-atpr). la columna de afinidad retenia especificamente deshidrogenasas dependientes de nadp+, y se empleo para purificar la glutation reductasa y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa de extractos crudos de levadura de panaderia, higado de lisa y hemolisado de eritrocitos de conejo, con recuperaciones y factores de purificacion elevados.
una segunda columna de silice se derivatizo con anticuerpos policlonales antiglutamina sintetasa (gs) de synechocystis y se empleo para purificar dicha enzima. la enzima purificada presentaba una actividad especifica de 72 u/mg y era electroforeticamente homogenea. la columna se empleo con fines analiticos para la cuantificacion de la cantidad de proteina gs presente en extractos crudos de synechocystis, obteniendose un valor comparable al calculado mediante inmunoelectroforesis cuantitativa.
