Estudio de la interactómica de la ruta fa/brca

• Autores: Gonzalo Hernandez Viedma
• Directores de la Tesis: Jordi Surrallés Calonge (dir. tes.), M. José Ramírez de Haro (codir. tes.)
• Lectura: En la Universitat Autònoma de Barcelona ( España ) en 2012
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: José A. Casado Olea (presid.), Jordi Minguillón Pedreño (secret.), Migel Angel Pujana Genestar (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología humana
      • Genética humana
    • Biología vegetal (botánica)
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: TESEO
• Resumen

  • Actualmente existen quince genes diferentes cuyas mutaciones se han encontrado en pacientes diagnosticados con la enfermedad de anemia de Fanconi. Pero todavía quedan pacientes en los que se han descartado estos quince genes, lo que significa que aún existen más genes involucrados en la anemia de Fanconi por descubrir. En este trabajo analizamos, mediante la inhibición por siRNA, diecinueve proteínas que están interaccionando con miembros de la ruta FA/BRCA y otras rutas de reparación con el objetivo de identificar nuevas proteínas no sólo implicadas en la anemia de Fanconi si no en la reparación de los Interstrand crosslinks o en la modulación de la respuesta a la quimioterapia antitumoral basada en agentes inductores de enlaces cruzados. De estos diecinueve genes, nueve no tienen ninguna implicación en la respuesta a los enlaces cruzados, lo que los descarta también como candidatos a genes implicados en la anemia de Fanconi. Otros nueve genes sí que muestran diversos grados de implicación como mínimo en la respuesta a los enlaces cruzados y el gen restante no pudo ser analizado por problemas con el siRNA. De los nueve genes implicados en la respuesta a los enlaces cruzados, nos encontramos con cinco que sólo muestran efectos sobre la mortalidad celular inducida por la mitomicina C, pero no en el bloqueo del ciclo. Otros tres genes muestran efecto sobre ambos parámetros (es el caso de EDC4, TOPBP1 y PPHLN1) por lo que son candidatos a formar parte de la ruta FA/BRCA. El último gen (STIM1) presenta un fenotipo de resistencia a los efectos de la mitomicina puesto que interacciona con FANCL (pieza clave en la activación de la ruta) es un buen candidato a ser un regulador negativo de la ruta FA/BRCA. Siguiendo con el estudio de EDC4, TOPBP1 y PPHLN1 analizamos la fragilidad inducida por DEB (hito de la ruta FA/BRCA) y sólo observamos dicha fragilidad en EDC4 y TOPBP1. Con estos resultados descartamos a PPHLN1 como miembro de la ruta FA/BRCA mientras que las otras dos sí que forman parte de la misma. A falta de encontrar pacientes con mutaciones en estos genes, siguen siendo buenos candidatos a genes implicados en la anemia de Fanconi. También estudiamos la monoubiquitinación de FANCD2, hito que permite separa la ruta FA/BRCA en la parte upstream y downstream. Los resultados de este estudio revelan que EDC4 formaría parte del grupo downstream (ya que la monoubiquitinación no se ve afectada) mientras que TOPBP1 lo haría del upstream (la monoubiquitinación desaparece). En el caso de EDC4, el hecho de ser una proteína downstream significa que también puede ser un buen candidato a un gen FA/BRCA implicado en el cáncer de mama hereditario.