Estudios moleculares del metabolismo del nitrato en Haloferax mediterranei

• Autores: Belén Lledó Bosch
• Directores de la Tesis: María-José Bonete (dir. tes.), Frutos C. Marhuenda Egea (codir. tes.)
• Lectura: En la Universitat d'Alacant / Universidad de Alicante ( España ) en 2005
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: José María Vega Piqueres (presid.), Carmen Lucía Pire Galiana (secret.), María Jesús Llama Fontal (voc.), José Martín Nieto (voc.), Carlos Vílchez Lobato (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: RUA
• Resumen

  • Haloferax mediterranei es un microorganismo halófilo extremo clasificado dentro del Dominio Archaea. Este mircroorganismo es capaz de crecer en medio mínimo con glucosa como única fuente de carbono y nitrato o nitrito como única fuente de nitrógeno. Hfx. Mediterranei manifiesta una elevada versarilidad fisológica.

    Cuando la disponibilidad de oxígeno en el medio es baja o nula, esta archaeon es capaz de crecer empleando NO3-como aceptor terminalde la cadena de transporte de electrones. A pesar del reciente número de genomas secuenciados no existe hasta el momento identificado ningún gen implicado en la asimilación del NO3- en arqueas. En este trabajo, por primera vez para un organismo Archaea, se han obtenido , secuenciado y analizado los genes para las Nas (nasA),NarK (nasB), MobA (nasC) y Nir (nasD). Estos genes se encuentran organizados en un operón que contiene los genes nasABC y otro monocistrónico. nasD , que se encuentran controlados por diferentes promotores. La regulación de la expresión está controlada a nivel transcripcional por sistemas generales, que corresponden a la disponibilidad de una fuente preferencial de nitrógeno y un control específico, que responde a la disponibilidad de NO3-/NO2-.

    Con el fin de comprobar la utilidad de la expresión heteróloga de enzimas halófilas para obtener elevadas cantidades de proteína se empleó la Nir de Hfx. Mediterranei. La purificación y caracterización de la enzima recombianate revelaron que sus propiedades son prácticamente idénticas a la enzima nativa.

    Para completar los estudios moleculares del metabolismo del NO3-en Hfx.

    Mediterranei se han secuenciado y analizado los genes implicados en la respiración del NO3- cuyas características son propias de organismos desnitrificantes.

    Se ha comprobado que la regulación ocurre a nivel transcripcional siendo la ausencia de O2 y la presencia de NO3- los activadores de la expresión.

    Así mismo, hemos purificado