Implementación de las técnicas de secuenciación masiva para la elaboración de nuevos algoritmos diagnósticos e identificación de nuevos genes en distrofias de retina

• Autores: Raquel Pérez Carro
• Directores de la Tesis: Almudena Ávila Fernández (dir. tes.), Carmen Ayuso García (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2017
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: José Fernández Piqueras (presid.), José María Millán Salvador (secret.), Eduardo José Gil Duarte Silva (voc.), Blanca García Sandoval (voc.), Ivan Conte (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
• Resumen

  • Las distrofias hereditarias de la retina son un conjunto de enfermedades degenerativas y generalmente progresivas, causadas por la afectación de los fotorreceptores y del epitelio pigmentario de la retina. Debido a su baja prevalencia en la población, las distrofias de retina pertenecen a las definidas como enfermedades raras. La retinosis pigmentaria es la distrofia de retina más común, cuya prevalencia aproximada es de 1 en 4000 individuos. Se caracteriza por una afectación primaria de los bastones siendo la ceguera nocturna el primer síntoma, seguido de una pérdida progresiva del campo visual periférico y una disminución progresiva de la visión central debida a la afectación secundaria de los conos.

    La retinosis pigmentaria presenta una elevada heterogeneidad tanto clínica como genética. En los últimos años se han descrito más de 90 genes como causa de RP no sindrómica y, a pesar de que las funciones de algunos de estos genes han sido estudiadas de forma exhaustiva es difícil establecer una precisa correlación genotipo-fenotipo.

    Esta tesis doctoral se ha centrado en el estudio de familias de nuestra cohorte española afectadas de retinosis pigmentaria con un patrón de herencia autosómico recesivo o esporádico mediante la utilización y combinación de distintas técnicas de secuenciación masiva. Los estudios de secuenciación de exoma completo han permitido establecer una nueva asociación del gen ABHD12 a retinosis pigmentaria no sindrómica, previamente reportado en síndrome de PHARC ampliando así el espectro fenotípico del mismo. Además se ha identificado un nuevo gen, ZNF408 como causa de retinosis pigmentaria autosómica recesiva en dos familias, demostrando su implicación tanto en el mantenimiento de la retina así como en el desarrollo vascular. Asimismo, se ha desarrollado una aproximación de secuenciación masiva dirigida basada en un panel de 75 genes previamente asociados a distrofias de retina, con la cual se han caracterizado 27 de las 47 familias estudiadas, obteniendo una tasa diagnóstica del 57%. Se han identificado 33 mutaciones patogénicas, 20 de las cuales (61%) eran nuevas y estaban localizadas en los genes ABCA4, CERKL, CNGA1, EYS, PDE6A, PRCD, RDH12, RP1, RP2 y USH2A. Adicionalmente, se han identificado tres grandes deleciones en los genes EYS y USH2A, demostrando el enorme potencial de estas tecnologías, no sólo en la detección de mutaciones puntuales sino también de grandes reordenamientos.

    Los resultados de este trabajo ponen de manifiesto que la capacidad diagnóstica de enfermedades tan heterogéneas tanto clínica como genéticamente como son las distrofias de retina, se ha incrementado considerablemente con el desarrollo de las nuevas tecnologías de secuenciación masiva habiendo demostrado ser una aproximación eficiente y fiable. Esto facilita la caracterización genética de las familias afectadas lo que resulta de gran importancia a la hora de proporcionar un diagnóstico preciso y un adecuado asesoramiento genético. Adicionalmente,estos estudios de NGS ayudarán al desarrollo de la medicina personalizada y permitirán la inclusión de estos pacientes afectados en futuras aproximaciones terapéuticas.