Resumen de Transformación plastidial de tabaco para la producción de un antígeno vacunal frente al parvovirus canino
La transformación del genoma plastidial, en vez del nuclear, tiene una serie de ventajas de indudable atractivo para su aplicación biotecnológica.
Los niveles de expresión de las proteínas recombinantes son del orden de 10-1000 veces superiores a los obtenidos por transformación nuclear. Se pueden integrar y expresar varios genes en forma policistrónica bajo el control de un único promotor, ya que los mecanismos de expresión son similares a los bacterianos. Una ventaja medioambiental importante es que se evita la dispersión del transgén a otras plantas, debido a la ausencia de plastidios en los granos de polen. Además no se ha descrito el silenciamiento génico ni existe el denominado efecto de posición debido al lugar de inserción del transgén puesto que la integración se realiza de forma dirigida por recombinación homóloga. Este último aspecto disminuye mucho el volumen de trabajo a la hora de seleccionar las líneas transformadas. El presente proyecto tiene como objetivos analizar la viabilidad de la transformación plastidial para la producción de antígenos vacunales y comprobar la respuesta inmune desarrollada tras su administración a animales de laboratorio. Para ello se expresó en cloroplastos de tabaco el péptido 2L21, que confiere protección en perros frente al parvovirus canino (CPV), fusionado al extremo carboxi-terminal de la subunidad B de la toxina del cólera (CTB) o de la proteína de fluorescencia verde (GFP). Se obtuvieron unos altos niveles de expresión de las proteínas de fusión (hasta el 31% respecto a la proteína soluble total). Una única planta es capaz de producir 310 mg del antígeno vacunal. Las dos proteínas de fusión fueron estables tanto en hojas jóvenes como viejas y la vida media estimada, determinada por marcaje y pulso-caza, fue superior a 48 h en ambos casos. El liofilizado de hojas pulverizadas supuso un sencillo método de tratamiento post-cosecha sin pérdidas significativas
