Análisis de un perfil de microARNs como factor pronóstico en cáncer de mama con afectación axilar

• Autores: Guillermo de Velasco Oria de Rueda
• Directores de la Tesis: Eva Ciruelos (dir. tes.), Luis Paz-Ares Rodríguez (dir. tes.), Juan Ángel Fresno Vara (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2016
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Eduardo Díaz-Rubio García (presid.), Irene Teresa Molina Martínez (secret.), Gema Moreno Bueno (voc.), Ana Lluch Hernández (voc.), Emilio Alba (voc.)
• Materias:
  • Ciencias agrarias
    • Ciencias veterinarias
      • Medicina interna
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en:  Docta Complutense (pdf)  Docta Complutense (pdf) 
• Resumen

  • Introducción: El cáncer de mama representa un grupo heterogéneo de tumores. Los microARNs (miRNAs) son moléculas no codificantes del 20-25 nucleótidos. Los miRNAs están surgiendo como biomarcadores específicos de tejido con potencial para ser aplicados en la clínica y que pueden ser utilizados para evaluar el pronóstico y la respuesta a los tratamientos en varios tipos de cánceres. En nuestro estudio, hemos correlacionado los perfiles de expresión de los miARN con supervivencia generando una firma pronóstica. La firma incluye 8 miRNA que estratifican en dos subgrupos (de alto riesgo y de bajo riesgo) una cohorte de pacientes con cáncer de mama con afectación axilar.

    Métodos: Pacientes: Se revisaron los casos de carcinoma de mama infiltrante con afectación ganglionar axilar al diagnóstico, en el Hospital Universitario 12 de Octubre entre el 1 de Enero de 1995 y el 31 de Diciembre de 2000. Un total de 172 pacientes se incluyeron en este estudio.

    Extracción y Expresión de miARN: El ARN total para los perfiles de miARNs se extrajeron a partir de zonas de FFPE El ARN total se aisló de las muestras tumorales empleando el RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation Kit (Ambion). Se sintetizó ADN complementario (ADNc) mediante retrotranscripción de ARN total aislada de las muestras empleando el ¿TaqMan MicroARN Reverse Transcription Kits¿ Applied Biosystems. El ADNc se introdujo en placas con 384 pocillos (Array TaqMan MicoRNA humano), y luego se realizó la RT-qPCR a tiempo real con el modelo ABI PRISM 7900HT. Generación de un perfil de miARN: Para la selección miRNAs incluidos en el análisis se realizaron 3 pasos: a. Se seleccionaron los miARNs con expresión medible en al menos 7 de las 19 muestras en la cohorte de exploración; b. los miRNAs con baja correlación en los niveles de expresión entre muestras FF y FFPE fueron descartados; c. se seleccionaron los miRNAs con al menos una variación de 7 por ciento en la cohorte de exploración. Metodología utilizada para encontrar un perfil reducido: Con la selección final de miARNs se generó un nivel de significación estadística para cada miARN basándose en un modelo de riesgo proporcional univariante. Los genes seleccionados se utilizaron para desarrollar un modelo de predicción basada en la expresión de miRNA y el riesgo de recurrencia utilizando un análisis supervisado. Resultados: Generación de un perfil de miARN: Para hacer el análisis más robusto, de los los 663 miRNAs humanos analizados, se seleccionaron 245 miRNAs que se expresaban en al menos 7 de las 19 muestras de la cohorte de exploración. 171 de 245 miRNAs mostraron niveles de expresión altamente correlacionados en muestras de FF y FFPE. Finalmente, 91 miRNAs tenían un coeficiente de variación superior a 7 por ciento y fueron seleccionados para ser aplicado en las 172 muestras. Un modelo de 8 miRNAs fue seleccionado porque demostró el mejor rendimiento. El perfil de 8 miRNA se asoció con la supervivencia libre de enfermedad. La supervivencia libre de enfermedad (SLE) a cinco años fue 69,6 para los pacientes en el grupo de alto riesgo y no se alcanzo para los pacientes en el grupo de bajo riesgo (HR: 3,75 IC del 95por ciento: 2,27-6,19; p mayor 0,0001). La supervivencia global (SG) a los cinco años fue del 98 por ciento para el grupo de bajo riesgo y 72 por ciento para el grupo de alto riesgo (HR: 4,51 IC del 95 por ciento: 2,6-8,61 p mayor 0,0001).

    Conclusión: Estos datos sugieren que los perfiles de miARNs a partir de tumores primarios pueden tener un papel pronóstico en el cáncer de mama con afectación axilar. Se describe un perfil de 8 miRNAs como factor pronóstico aplicado al riesgo de recurrencia y de muerte específica.