Resumen de Desarrollo de metodologías analíticas para la separación, detección y caracterización de biomarcadores glicoproteicos en muestras biológicas
La glicómica se ha convertido en una de las ciencias ómicas de mayor interés, en gran parte debido a la importancia de los carbohidratos en multitud de procesos biológicos y a su implicación en un gran número de enfermedades. En la última década, los trabajos científicos relacionados con la glicómica han aumentado considerablemente, poniendo de manifiesto la gran novedad e impacto que posee esta ciencia ómica. En la actualidad, la espectrometría de masas (MS) es la técnica analítica más utilizada en el estudio de la glicosilación de proteínas (glicoproteómica) lo que es debido a su elevada capacidad para obtener información estructural de biomoléculas.
El estudio de la glicosilación de proteínas por MS se puede llevar a cabo a tres niveles diferentes: glicoproteína intacta, glicopéptidos y/o glicanos. De todos ellos, el análisis de los glicopéptidos proporciona varias ventajas, ya que se obtiene información de la composición de los glicanos de cada punto de glicosilación, así como del grado de ocupación. No obstante, en general, es necesaria una técnica de separación previa a la detección por MS para evitar que los péptidos presentes en el digesto supriman la ionización de los glicopéptidos. Consecuentemente, esta tesis doctoral se ha centrado principalmente en el desarrollo de metodologías analíticas para el estudio de la glicosilación de diferentes proteínas a nivel glicopeptídico, utilizando la cromatografía de líquidos capilar y la electroforesis capilar acopladas a la espectrometría de masas (CapLC- MS y CE- MS, respectivamente).
Sin embargo, detectar cambios en la abundancia y en la composición de los glicanos unidos a la proteína puede no ser suficiente para diagnosticar ciertas enfermedades y buscar dianas terapéuticas. A veces un proceso patológico puede afectar sólo a un isómero del glicano y no a los demás, siendo necesario, en este caso, el análisis de los isómeros de los diferentes glicanos para entender la extensión de la enfermedad. En este sentido, la movilidad iónica acoplada a la espectrometría de masas (IM-MS), ha suscitado gran interés como una técnica con potencial para la separación de isómeros. Por este motivo, en esta tesis doctoral, también se ha evaluado la eficacia del IM-MS para la separación de isómeros debidos al tipo de enlace del ácido siálico a nivel de glicoproteína intacta, de glicopéptidos y de glicanos.
