Características y localización de la región de fusión del rabdovirus de la septicemia hemorrágica de la trucha

• Autores: Ana Isabel Rocha Roso
• Directores de la Tesis: Julio Coll Morales (dir. tes.), María Amparo Estepa Pérez (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2004
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: M. Encina González Martinez (presid.), María José Borja y Tomé (secret.), Sara I. Pérez Prieto (voc.), Alberto José Villena Cortés (voc.), Rafael Blasco Lozano (voc.)
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Docta Complutense
• Resumen

  • El modelo elegido en este trabajo para estudiar la fusión de los rabdovirus ha sido el virus de la septicemia hemorrágica vírica (VSHV), porque origina una de las enfermedades causante de mayores mortalidades en la producción piscícola mundial y su biología molecular es una de las mejor conocidas. Este estudio se centra en la fusión de membranas virus-hospedador que origina la entrada del genoma viral en la célula. Tal y como se ha demostrado para otros virus, el estudio de la fusión puede ayudar tanto al diseño de agentes terapéuticos para frenar la infección como la generación de vacunas ADN o atenuadas. Se había demostrado en la proteína G de VSHV la existencia de un dominio de interacción con fosfolípidos aniónicos entre los aa 82-109 (p2) (Estepa y Coll, 1996) y que la posición del péptido de fusión de ésta proteína podría localizarse entre los aa 142-159, por comparación con el virus de la estomatitis vesicular (Walker y kongsuwan, 1999). La existencia en VSHV de un puente disulfuro entre la C110 (contenida en el p2) y la C152 (contenida en el péptido de fusión), y de mutantes con alteraciones en el pH de fusión localizados alrededor de la C110 (Gaudin et al, 1999), sugirió que la región implicada en fusión podría localizarse simultáneamente en el p2 y en el péptido de fusión de VSHV. Por todo ello, se decidió enfocar el estudio de la región situada entre los aa 56-159 que comprende ambos dominios. El trabajo se ha desarrollado en 2 líneas paralelas. Por un lado, se han estudiado comparativamente las secuencias de la región seleccionada entre distintos géneros de rabdovirus y aislados de VSHV y funcionalmente utilizando péptidos sintéticos (p2, p3, p4, p9 y frg#11) derivados de segmentos de la región. Todo ello ha facilitado en diseño posterior de los mutantes estudiados en este trabajo. Por otro lado, se ha optimizado un ensayo de fusión utilizando células de pez transfectadas con el gen de la proteína G para poder estudiar la capacidad de fusión de los mutantes diseñados. Las dos líneas de investigación concluyeron en que se describen por primera vez mutantes defectivos en fusión que afectan no sólo al péptido de fusión sino también al dominio de interacción con fosfolípidos. Los datos obtenidos permiten avanzar un modelo estructural de la penetración de la proteína G de VSHV en la membrana de la célula hospedadora en el que el segmento p2, el p3 y el péptido de fusión se introducen en la membrana mientras que el p9 y el p4 permanecen fuera de la membrana.