Estudio del promotor VAV1 para la expresión de genes en el sistema hematopoyético: aplicaciones en transgénesis y terapia génica

• Autores: Elena Almarza Novoa
• Directores de la Tesis: Juan Antonio Bueren Roncero (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2007
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Agustín Zapata González (presid.), Manuel Guzmán Pastor (secret.), Eugenio Montini (voc.), Francisco Martín Molina (voc.), Jordi Barquinero (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
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• Resumen

  • El promotor que regula la expresión del protooncogén vav se considera de gran interés debido a que este gen se expresa de forma ubicua en células del sistema hematopoyético. La expresión del protooncogén vav viene regulada por cinco sitios hipersensibles para Dnasa I (HS), siendo el primero de ellos (vavHS1) el promotor proximal. Se ha generado una línea de ratones transgénicos en cepa pura con fenotipo Ly5.1 en el que la expresión del gen marcador DeltahcD4 estaba bajo el control del promotor vavHS21/45. En estos animales se observó la expresión de DeltahCD4 en todos los linajes analizados, tanto en sangre periférica como en médula ósea, incluyendo progenitores primitivos de médula ósea. Nuestros resultados demuestran por primera vez que el promotor vavHS21/45 es activo en precursores primitivos con capacidad de repoblación a largo de plazo. Se ha generado un vector en el que la expresión del gen marcador GFP viene dirigida por el promotor proximal de vav en el contexto de un vector autoinactivante. Se ha observado que la actividad de este promotor es débil y estable en líneas celulares transducidas con el lentivirus vavHS1. También se ha podido observar que esta débil y estable actividad del promotor vavHS1 se mantiene en céulas hematopoyéticas primitivas murinas y humanas in vivo. Estas características se mantuvieron independientemente de la orientación del promotor, del contexto retroviral o de la presencia/ausencia de la secuencia Wpre. Para demostrar la eficacia terapéutica del promotor vavHS1 se generó un vector lentiviral autoinactivante que expresaba el gen de Anemia de Fanconi A (FANCA. Así, y de manera consistente con datos previos, comprobamos que este vector proporcionaba una expresión débil del gen FANCA pero que, sin embargo, permitía la corrección del fenotipo de fanconi que presentaban las células deficientes de este gen. En conclusión, nuestros resultados sugieren que tanto vectores lentivirales autoinactivantes