Resumen de Síntesis quimioenzimática de glicoconjugados y estudio cuantitativo de su implicación en procesos de reconocimiento molecular
La presente Tesis tiene como objetivo el desarrollo de una metodología tanto química como enzimática de síntesis de glicoconjugados correctamente funcionalizados que puedan ser posteriormente utilizados para llevar a cabo estudios de interacción carb ohidrato-proteína mediante diferentes técnicas como RMN y SPR.
En primer lugar, se ha conseguido sintetizar glicoconjugados con un disacárido modelo de lactosa para llevar a cabo este tipo de estudios. En un primer momento, se introdujo una cadena es paciadora en la estructura de modo que el anillo de piranosa permaneciera inalterado sin afectar así a sus propiedades biológicas. Posteriormente, se emplearon 2,6-diaminopiridina y 1,5-diaminonaftaleno para el marcaje fluorescente de los glicoconjug ados mediante diferentes metodlogías. De este modo se optimizó la síntesis de estos compuestos. Pero además, estos compuestos fluorescentes presentan un grupo amino libre que permitió, por un lado, la conjugación con una molécula de biotina y por otr o lado, su inmovilización covalente en diferentes superficies.
En segundo lugar, los glicoconjugados fluorescentes sintetizados, fueron inmovilizados en diferentes superficies. El glicoconjugado biotinilado fue inmovilizado en superficies tamizadas c on estreptavidina y neutravidina, y los glicoconjugados fluorescentes que presentaban el grupo amino libre, fueron inmovilizados con diferentes superficies funcionalizadas con grupos carboxilo: una superficie de oro, una matriz de dextrano y una matr iz de alcanotioles de cadena mixta.
La inmovilización de los glicoconjugados imitando su presentación en las membranas biológicas permitió llevar a cabo estudios de reconocimiento molecular con diferentes proteínas mediante la técnica de SPR. De este modo, se llevó a cabo el estudio de reconocimiento molecular de los diferentes glicoconjugados y se estudió la influencia de las diferentes superficies en la presentación de los glicoconjugados y en la interacción con las proteínas de unión a carboh idrato. Por último, se estudió la interacción de los glicoconjugados fluorescentes inmovilizados en la superficie que mejores características presentó con varias lectinas (lectina de Viscum album, galectina-1, 3 y 16) implicadas en importantes proces os biológicos. Mediante SPR se estudió el comportamiento cinético de la interacción así como la afinidad de estas proteínas por los glicoconjugados y posteriores estudios mediante RMN y modelado molecular permitieron localizar los epítopos y...
