Resumen de Aislamiento, clonación y análisis de once nuevas genes del protozoo ciliado oxytricha nova: implicaciones en el proceso de enquistamiento
El principal objetivo de esta Tesis Doctoral es el aislamiento y caracterizacion molecular de genes macronucleares del ciliado hipotrico Oxytricha nova que se encuentren presumiblemente implicados en el proceso de enquistamiento de este microorganismo. El enquistamiento es un proceso de diferenciacion celular que tiene lugar en protozoos ciliados cuando las condiciones ambientales son adversas. Este proceso conlleva una serie de cambios estructurales, morfologicos y nucleares que necesariamente implican un cambio en el patron de expresion de muchos delos genes de estos microorganismos.
Para llevar a cabo este estudio se aislaron muestras de ARNm procedentes de diferentes fases del proceso de diferenciacion, asi como de celulas vegetativas y quistes de resistencia maduros. Posteriormente, se procedio a la sintesis del ADNc de las diferentes poblaciones de ARNm y se amplificaron mediante PCR utilizando cebadores de secuencia arbitraria (DDRT-PCR). Tras comparar los diferentes patrones de polimorfismos obtenidos, se aislaron aquellas bandas que aparecian exclusivamente en estadios prequisticos o en quistes de resistencia maduros pero que no aparecian en celulas vegetativas.
Estas bandas fueron clonadas y secuenciadas.
Utilizando este metodo se aislaron diferentes fragmentos genicos que fueron marcados e hibridados con ADN macronuclear para determinar el tamaño de la molecula de ADN macronuclear a la que pertenecia cada una de ellas.
Algunas de estas moleculas (4 en total) pudieron ser secuenciadas totalmente aplicando las tecnicas de Mac-End-PCR o End-End-PCR. El resto se encuentran aun en proceso de secuenciacion. Algunas de las moleculas caracterizadas (total o parcialmente) contienen genes como la alfa-manosidasa lisosomal, proteinas HMG(High Mobility Group protein), ARNr 5S,proteina ribosomica S26, ATPasa de Cu2+, ATPasa Na+/K+, fosfatidilinositol-4-fosfato-5-quinasa o la S-adenosilmetionina sintetasa.
En el trabajo se realiza una
