Caracterización molecular y funcional de las interacciones de la map quinasa slt2 con otros elementos de la ruta de señalización que controla la integridad celular de saccharomyces cerevisiae

• Autores: Maria Soler Nuñez
• Directores de la Tesis: César Nombela Cano (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 1997
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Miguel Sánchez Pérez (presid.), Jesús Pla Alonso (secret.), Tomás González Villa (voc.), María Fernández Lobato (voc.), Francisco Justo del Rey Iglesias (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Microbiología
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• Resumen

  • Este trabajo se enmarca dentro de una linea de investigación encaminada al estudio de la ruta de transducción de señales que controla el mantenimiento de la integridad celular en la llevadura saccharomyces cerevisiae. Uno de los elementos de esta ruta es la map quinasa slt2, la cual, mediante estudios genéticos de epistasis había sido previamente situada tras las mapkks redundantes denominadas mkk1. Y mkk2. En el estudio presentado de demustra la existencia de una interacción directa entre cada una de dichas proteinas y slt2, tanto mediante la utilización del sistema de "dos hibridos" que permite la detección de asociaciones de proteinas in vivo, como mediante técnicas de copurificacion in vitro. Se han caracterizado además los dominios proteicos que intervienen en esta interacción, que es fuerte e independiente del estado de activación de la ruta. Concretamente las mapkks interaccionan mediante su dominio n-terminal regulatorio con la region catalítica n-terminal de slt2. El extremo c-terminal no catalítico de esta ultima proteína, que incluye una region poliglutaminica dispensable para su funcionalidad, posee un dominio criptico de activación de la transcripción que se pone de manifiesto en el ensayo de "dos híbridos" cuando la proteína completa o un fragmento proteico que incluye dicha region se fusiona a un dominio de unión a dna. Mediante técnicas inmunológicas se ha establecido que tanto mkk1 como mkk2 se encuentran exclusivamente en el citoplasma, mientras que slt2 presenta además una localización nuclear. Mediante mutagenesis dirigida se ha obtenido y estudiado un alelo mutante inactivo de slt2 al sustituir los aminoácidos fosfoaceptores del dominio de activación, demostrándose la esencialidad de dichos residuos para la funcionalidad de la proteína. El estudio de la letalidad causada por la sobreexpresión de un alelo hiperactivo de pkc1 ha demostrado que no es debida a una activación permanente de slt2, ni tampoco a u