Resumen de Expresión de genes bcl-2, reguladores de apoptosis, en epitelio tubular renal de rata en respuesta a isquemia-reperfusión memoria para optar al grado de doctor
Se ha estudiado la expresión de ARN mensajero de bcl-2, bcl-xl, bcl-xS y bax en los títulos contorneados proximal, parte recta del túbulo proximal, porción gruesa ascendente del asa de Heale y túbulo contorneado distal del riñón de ratas wistar sometidas a microdisección nefronal tras un periodo de isquemia de 30 minutos, con reperfusión de 0,3,6,24,48,96,144 y 216 horas de respectivamente. Los resultados obtenidos en cada segmento y en cada tiempo de reperfusión se compararon con los obtenidos en un grupo control constituido por ratas sometidas a simulación de isquemia y sacrificadas en periodos coincidentes con los de reperfusión del grupo isquemico. En total se utilizaron 96 riñones procedentes de 48 ratas, 3 por cada grupo, isquémico o control en cada tiempo de reperfusión o de postsimulación respectivamente.
El material para estudio se obtuvo tras la extracción renal mediante su corte sagital y obtención de cuñas corticales o medulares, incubadas con colagenasas y microdiseccionadas en placa de Petri para la identificación y obtención de los segmentos tubulares objeto del estudio.
La expresión del ARN mensajero en cada caso se analizó y cuantificó tras su extracción del material tubular y amplificación con RT-PCR. En total se estudiaron 384 muestras correspondientes a la expresión de bcl-2, bcl-xl, bcl-xS y bax en los cuatro segmentos tubulares referidos anteriormente.
Los resultados demuestran que hay sobrexpresión de genes bcl-2 en el epitelio tubular de rata tanto en fases precoces como en fases tardías de reperfusión lo que sugiere la importancia que tienen estos genes en la regulación de la apoptosis a lo largo de todo el ciclo de lesión y reparación tubular tras isquemia. La isquemia y la reperfusión parecen actuar como estímulos hasta cierto punto independientes para la expresión génica, ya que se encontró sobrexpresión de bcl-2 en la parte gruesa de la rama del asa de Henle y en menor medida de bcl-xl en los túbulos contorneados distal y proximal en isquemia pura, mientras que bax, bcl-xS solo se sobreexpresaron en la fase de reperfusión.
Bcl-2 se sobreexpresó en todos los segmentos tubulares excepto en la parte recta del túbulo proximal; la mayor expresión se produjo en el túbulo contorneado distal y fue muy precoz y prolongada, sobre todo, en los túbulos contorneados proximales y distales.
Bcl-xl se sobrexpresó en todos los segmentos tubulares analizados, sobre todo en la porción medular gruesa del asa de Henle dónde, además, lo hizo precozmente y de forma duradera. Bcl-xS se sborexpresó en todos los segmentos tubulares, excepto en la parte recta del túbulo proximal con una mayor expresión en la porción gruesa medular del asa del Henle. Bax no se sobrexpresó en el túbulo contorneado distal, aunque si lo hizo interesantemente en la porción gruesa del asa de Henle y en el túbulo contorneado proximal.
La parte recta y contorneada del túbulo proximal, por este orden, fueron las que manifestaron una menor respuesta en la expresión génica surgiriendo su mayor vulnerabilidad a la isquemia-reperfusión.
Por el contrario, la expresión génica fue muy intensa y equilibrada entre genes inhibidores y favorecedores de apoptosis, en la porción gruesa del asa de Henle. La sobrexpresión de bcl-2 que se produjo en este segmento en isquemia pura sugiere un cierto grado de acondicionamiento a la hipoxia de la porción medular gruesa del asa de Henle. La diferencia entre los niveles de bcl-xL enlas fa ses muy precosos de reperfusión y, sobre todo de bcl-2 prácticamente a lo largo de todos los tiempos de reperfusión, sobre bcx en el túbulo contorneado distal, sugiere la existencia de una respuesta adaptativa a la isquemia de ese segmento probablemente porque al ser el reservorio para la producción de factores de crecimiento es esencial para conseguir la reparación y regeneración de las demás áreas tubulares dañadas en los procesos de isquemia-reperfusión.
