Is91: mecanismo de transposición e implicaciones ecológicas

• Autores: María Pilar Garcillán Barcia
• Directores de la Tesis: Fernando de la Cruz (dir. tes.), M. Victoria Mendiola Ambrosio (codir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Cantabria ( España ) en 2002
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Manuel Espinosa Padrón (presid.), Félix Javier Sangari García (secret.), Juan García Lobo (voc.), Cayo Ramos Rodríguez (voc.), Amparo Latorre (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
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• Resumen

  • Los resultados obtenidos en este trabajo demuestran que los intermediarios circulares de dsDNA de IS91 son intermediarios funcionales en el proceso de transposición de esta secuencia de inserción. Se ha demostrado que los residuos de tirosina Y249 y Y253 de la transposasa de IS91, que son análogos a los residuos catalíticos de la proteína iniciadora de la replicación por círculo rodante del fago 0X174, son esenciales en el proceso de transposición de esta secuencia. Estos residuos resultan imprescindibles tanto para el paso de producción de intermediarios circulares de ssDNA y dsDNA de IS91 como para la integración de los mismos, pero desempeñan roles funcionales diferentes en la reacción. También ha quedado demostrado que la transposasa de IS91 es capaz de reconocer un conjunto de tetranucléotidos adyacentes a la secuencia ori91 mayor que el reportado hasta el momento. Sin embargo, el reconocimiento de la secuencia blanco en el recipiente continúa siendo extremadamente específico por las secuencias 5'CTTG y 5'GTTC. La conversión de los intermediarios circulares de ssDNA en dsDNA debe transcurrir por un mecanismo de primado no dependiente de la RNA polimerasa. Se analizó también la distribución de isoformas de la familia de IS91, así como las implicaciones ecológicas de su transposición monoterminal como medio de diseminación de genes relacionados con la virulencia y patogenicidad. Por otra parte, se ha estudiado la influencia de la complementariedad entre las secuencias núcleo y núcleo invertido de los casetes de genes en la tasa de integración y escisión de los mismos, poniendo a punto ensayos de integración y escisión de casetes.