Proteínas de fase aguda en el perro: estudios de validación analítica y clínica

• Autores: Silvia Martínez Subiela
• Directores de la Tesis: José Joaquín Cerón Madrigal (dir. tes.), Fernando Tecles Vicente (codir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Murcia ( España ) en 2003
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Cándido Gutiérrez Panizo (presid.), Josep Pastor Milán (secret.), Pedro Jesús Ginel Pérez (voc.), Peter David Eckersall (voc.), Andreas Moritz Sánchez (voc.)
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• Resumen

  • En el presente trabajo se establecieron varios objetivos (metodológicos y de aplicación clínica) para intentar resolver algunas de las limitaciones existentes para el empleo de las determinaciones de proteínas de fase aguda en la especie canina.

    Como primer objetivo se validaron los análisis comerciales disponibles en la actualidad para la determinación de haptoglobina, proteína C reacitva (CRP) y amiloide A sérico (SAA) en el perro. Estas pruebas mostraron una buena precisión intradeterminación (CVs <10%) y exactitud, por tanto pueden ser empleadas en nuestro laboratorio para medir haptoglobina, proteína C reactiva y amiloide A sérico en muestras de la especie canina.Sin embargo, los análisis de CRP y SAA mostraron una alta imprecisión interdeterminación, por lo que en el resto de ensayos realizados las muestras se congelaron a -20% y analizaron en la misma serie analítica.

    Como segundo objetivo se desarrollo y validó en nuestro laboratorio en nuevo método automatizado basado en la capacidad oxidativa de la ceruloplasmina sobre la p-fenilenediamina para la determianción de esta proteína en el perro. Se determinarón las concentraciones óptimas de sustrato (61,5 mg en 25 ml de tampón), el pH óptimo del tampón (5,2), los tiempos óptimos de lectura (200-300 segundos) y el efecto del EDTA en la reacción (negativo).

    Para la validación se evaluó la precisión y exactitud del método, siendo ambas satisfactorias. Se comprobó la estabilidad del reactivo (hasta 1 mes en congelación,15 días en refrigeración y 7 días a temperatura ambiente) y se estudió su posible aplicación en muestras biológicas, comprobándose su utilidad para la detección de procesos inflamatorios tales como piometra o traumatismos.

    El tercer objetivo se centró en la evaluación de los posibles efectos que la hemólisis, lipemia,bilirrubinemia y los anticoagulantes pueden tener sobre los resultados de proteína C reactiva, amiloide