Resumen de Análisis estructural y bioquímico de la unión al dna y la activación transcripcional de phob, el regulador de respuesta de un sistema de dos componentes bacteriano
La principal forma en la que las bacterias responden a estímulos ambientales se realiza mediante los sistemas de dos componentes que consisten de una histidina kinasa y un regulador de respuesta. PhoB es un activador transcripcional de este segundo tipo que controla la captación de fosfato en Escherichia coli activando casi a 40 genes. Su estructura consiste en dos dominios: un dominio regulador fosforilable en un aspartato y un dominio efector de unión al DNA y transactivador (phoBE). Este último contacta con la subunidad sigma70 de la RNA polimerasa para activar la transcripción. Dicha subunidad reconoce los promotores bacterianos de genes housekeeping y estructuralmente contiene 4 dominios. El dominio 4 es el que interacciona con PhoBE.
El presente trabajo describe las estructuras critalográficas de PhoBE en su forma apo, unido a DNA y unido al factor sigma70, además de diferentes experimentos bioquímicos para complementar la información estructural y entender los mecanismos de unión al Dna y de activación de la transcripción. De esta forma, PhoBE contiene un dominio winged-helix que se une al DAN como un dímero en tándem introduciendo las hélices de reconocimiento en el surco mayor del DAN y los Wings en el menor. El DNA se halla curvado de forma suave 40º y la curvatura es debida a una comprensión del surco menor por parte del wing. Los contactos directos con las bases se establecen tanto por la hélice de reconocimiento por el wing.
Y expone lateralmente las zonas de interacción para unirse al domino 4 del factor sigma70. Experimentos con geles de retardo con promotores que contienen más de una pho box, muestran una unión jerárquica y cooperativa, de forma que la unión del primer dímero facilita la del segundo. Esto se explica por la presencia en la estructura del dímero proteína-proteína.
