Resumen de Silencing and variegation of exogenous protein expression driven by a tetracycline-regulated system in transgenic mice planned to model a human neurodegenerative disease
El objetivo principal de la tesis era crear un sistema condicional para el estudio in vivo (ratones transgénicos) en el que la expresión de una proteína a (SOD1, portador dela mutación G93A) se pudiera controlar. Hasta ahora la Esclerosis Lateral Amiotrófica de tipo familiar se ha analizado mediante modelos transgénicos clásicos. A partir de estos modelos se han elaborado distintas hipótesis sobre cual pudiera fuer la relación causa-consecuencia entre la proteína SOD1 y los mecanismos moleculares causantes de degeneración (muerte de las motoneuronas) y por tanto los símptomas clínicos manifestados en los ratones modelos. Pero el mecanismo/s exacto que desencadena la patología se desconoce todavía. Por este motivo, decidimos que sería interesante poder controlar los lapsus de tiempo en el que la proteína mutante estuviera presente en las células del organismo transgéncio, y así poder estudiar la reversibilidad el fenótipo, y entender que mecanismos clave estaban implicados en la patología. Para realizar esto, nos propusimos construir un sistema condicional (basado en tetraciclina; tet-off) apoyado por ejemplos exitosos publicados.
En particular, el sistema tet-off está compuestos por dos elementos: un elemento activator (de la expresión) y un elemento responsivo (a partir del cual se controla la expresión del gen humano clonado y de interés). Por ello, seleccionamos este sistema, puesto que nos permitía clonar el cDNA de la SOD1 que codifica para la proteína mutante conocida como G93A (indica la mutación sobre la posición amonoacídica) y controlar su expresión en el tiempo y en el espacio (por ejemplo el sistema nervioso, dónde la enfermedad se manifiesta). Así pues generamos ocho líneas viables de ratones trasngénicos "responsivos" que se cruzaron con la cepa de ratones "activadores" los cuales son portadores de un transgen en el que la expresión del elemento "tTA" (que evoca la actividad transcripcional del promotor responsiv
