Monitorización de la exocitosis mediante técnicas fluorescentes en células cebadas

• Autores: Vicente Valero Cumplido
• Directores de la Tesis: Guillermo Álvarez de Toledo Naranjo (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Sevilla ( España ) en 2007
• Idioma: español
• ISBN: 9788469359426
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Idus
• Resumen

  • La fusión de las vesículas con la membrana celular, es un evento universal en células eucarióticas, pero no son del todo conocidos los mecanismos que acontecen, desde que se produce el estímulo para la secreción, hasta que tiene lugar la exocitosis.Gran parte del conocimiento adquirido en los últimos años, ha llegado de forma paralela a la innovación de nuevas técnicas que han contribuido a responder a múltiples cuestiones sobre el mecanismo secretor. Cabe destacar las técnicas electrofisiológicas y moleculares, si bien, la síntesis de colorantes específicos y su registro de fluorescencia, también han aportado datos importantes.Por este motivo, y como objetivo general del presente trabajo, ha sido el desarrollo de un sistema de imágenes, que añade una técnica más al laboratorio, que nos permita conocer más aspectos relacionados con los mecanismos que participan en la fusión de las vesículas de secreción con la membrana plasmática.Los objetivos específicos, que de forma secuencial se cubrieron durante el desarrollo del proyecto, fueron:1. Montar un sistema de fluorimetría de bajo coste, que permita estudiar, con una elevada resolución, dónde y en qué momento se produce la fusión de la vesícula con la membrana plasmática.2. Programar una aplicación que adquiera imágenes a partir de una CCD, las procese y las analice de forma rápida y versátil.3. Estudiar los diferentes colorantes existentes en el mercado, conocer sus características espectroscópicas y su aplicabilidad a distintos tipos celulares.4.Validar la metodología anterior en células cebadas, que han sido estudiadas de forma extensiva para el estudio de la exocitosis, teniendo en cuenta que los mecanismos importantes por los que se rige el proceso secretor en mastocitos deber ser también relevante en otros modelos de células excitables tales como cromafines o neuronas.5. Con este sistema, analizar la focolización de la exocitosis en células cebadas. Determinar que existen zonas membranarias especializadas en el proceso secretor, y que cuando se induce dicho proceso en una región, la exocitosis no se produce como un “todo o nada” sino que por el contrario afecta únicamente a esa región.6. Determinar y cuantificar, si lo hay, el movimiento de la vesícula antes de su fusión con la membrana. En función de tal cuantificación, determinar los posibles estados del grupo (movimiento del grano desde citosol a la membrana, de la membrana a los lugares secretores o si está anclado y por tanto no sufre desplazamiento).