Produccion del factor liberador de la hormona de crecimiento humano (hgrf) en sistemas heterologos

• Autores: Francisco Vidal Perez
• Directores de la Tesis: Albert Boronat (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 1997
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Juan Aguilar Piera (presid.), Montserrat Busquets Abió (secret.), Antonio Cortés Tejedor (voc.), Mercè Pérez Riba (voc.), Joaquín Ariño Carmona (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Hormonas
      • Biología molecular
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• Resumen

  • SE HA LLEVADO A CABO LA PRODUCCION DE FACTOR LIBERADOR DE LA HORMONA DE CRECIMIENTO HUMANO (HGRF) MEDIANTE PROCESOS BIOTECNOLOGICOS UTILIZANDO EL MICROORGANISMO ESCHERICHIA COLI ASI COMO PLANTAS TRANSGENICAS DE TABACO (NICOTIANA TABACUM). PARA LA PRODUCCION DEL GRF EN ESCHERICHIA COLI SE HAN DISEÑADO Y CONSTRUIDO TRES VECTORES DE EXPRESION EN BASE A DOS ESTRATEGIAS DIFERENTES. LOS VECTORES PPHOAGRF. 1 Y PPHOAGRF.2 SON PORTADORES DE LA SECUENCIA CODIFICANTE PARA EL GRF FUSIONADA EN 5' CON LA SECUENCIA CODIFICANTE PARA EL PEPTIDO SEÑAL DE LA FOSFATASA ALCALINA (PHOA) AUTOLOGA. LA FUNCION DE ESTE PEPTIDO ES LA DE DIRIGIR EL TRANSPORTE Y PROCESAMIENTO DEL GRF AL ESPACIO PERIPLASMICO DE LA BACTERIA. LA DIFERENCIA FUNDAMENTAL ENTRE AMBOS VECTORES ES LA UTILIZACION DE PROMOTORES DISTINTOS EN EL CONTROL DE LA TRANSCRIPCION DE LA SECUENCIA PHOA-GRF. ESTA DIFERENCIA SUPUSO VARIACIONES APRECIABLES EN LOS NIVELES DE EXPRESION DE LA PROTEINA RECOMBINANTE. EL TERCERO DE LOS VECTORES CONSTRUIDOS (PGST-GRF) DIRIGE LA EXPRESION DEL GRF FUSIONADO A LA PROTEINA GLUTATION-S-TRANSFERASA DE FORMA QUE ESTA PROTEINA SE ACUMULA EN EL CITOSOL DEL MICROORGANISMO Y PUEDE SER RECUPERADA MEDIANTE CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD EN COLUMNAS AGAROSA-GLUTATION. ASIMISMO, ENTRE AMBAS PROTEINAS SE HALLA LA SECUENCIA RECONOCIDA POR UNA ENDOPROTEASA DE ALTA ESPECIFICIDAD (FACTOR XA) QUE PERMITE LIBERAR EL GRF DE LA PROTEINA DE FUSION. ESTA ULTIMA ESTRATEGIA FUE LA QUE OFRECIO MAYORES NIVELES DE EXPRESION Y SE UTILIZO PARA LA PRODUCCION Y PURIFICACION DEL GRF RECOMBINANTE. FINALMENTE, LA ESTRATEGIA DE FUSION GST-GRF FUE UTILIZADA EN LA PRODUCCION DE LA HORMONA HUMANA EN PLANTAS TRANSGENICAS DE TABACO. LA PROTEINA DE FUSION FUE PURIFICADA A PARTIR DE EXTRACTOS TOTALES DE HOJAS DE LAS PLANTAS TRANSGENICAS MEDIANTE CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD UTILIZANDO COLUMNAS AGAROSA-GLUTATION.