Estudio de la regulacion de genes de tomate (lycopersicon esculentum) que codifican el enzima leucina-aminopeptidasa

• Autores: Omar José Ruiz Rivero
• Directores de la Tesis: Salomé Prat (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 1997
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Montserrat Pages Torrens (presid.), Santiago Imperial Ródenas (secret.), José Sánchez Serrano (voc.), Albert Ferré Codina (voc.), Francesc Villarroya Gombau (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Hormonas
      • Biología molecular
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• Resumen

  • UTILIZANDO COMO SONDA UN CLON DE CDNA DE PATATA (SOLANUM TUBEROSUM) QUE CODIFICA UNA LEUCINA-AMINOPEPTIDASA (LAP), INDUCIBLE EN HOJAS EN RESPUESTA A HERIDA MECANICA Y AL TRATAMIENTO CON ACIDO ABSCISICO (ABA) Y METIL JASMONATO (MEJA), FUE POSIBLE AISLAR DOS CLONES GENOMICOS HOMOLOGOS DE TOMATE (LYCOPERSICON ESCULENTUM). EL ANALISIS DE ESTOS CLONES GENOMICOS MEDIANTE DIGESTION CON ENZIMAS DE RESTRICCION Y ENSAYOS DE SOUTHERN, REVELO QUE UNO DE ELLOS CONTENIA UNA SOLA COPIA DEL GEN LAP, MIENTRAS QUE EL OTRO CONTENIA DOS COPIAS GENICAS EN TANDEM DE ESTE GEN. LA SECUENCIACION DE LAS TRES COPIAS GENICAS DEMOSTRO QUE DOS DE ELLAS CORRESPONDIAN A UN MISMO ALELO LAP (LAP 17.2), MIENTRAS QUE LA TERCERA COPIA CORRESPONDIA A UN ALELO DIFERENTE (LAP 17.1). LA EXPRESION DE LA ACTIVIDAD BETA- GLUCURONIDASA EN RESPUESTA A MEJA, EN HOJAS DE PLANTAS TRANSGENICAS DE PATATA QUE PORTABAN UN GEN QUIMERICO QUE SE HABIA CONSTRUIDO FUSIONANDO UNA REGION PROMOTORA DE 1.18 KB (-1187 A -3) DEL GEN LAP 17.1 O UNA DE 2.37 KPB (-2371 A -3) DEL GEN LAP 17.2 AL GEN UIDA, DEMOSTRO QUE AMBOS PROMOTORES LAP ERAN ACTIVOS. UNA DELECION 3' DE UN FRAGMENTO PROMOTOR HASTA LA POSICION 79 PB (-79 A -1), O UNA DELECION 5' DE UN FRAGMENTO DE 880 PB (-1187 A -307) DEL PROMOTOR DEL GEN LAP 17.1, AUN RESPONDIAN A LA ACCION DEL MEJA, EN PLANTAS TRANSGENICAS DE PATATA. ESTE RESULTADO SUGERIA QUE TODOS LOS ELEMENTOS PROMOTORES NECESARIOS PARA LA REGULACION DE LOS GENES LAP POR MEJA, PODRIAN ESTAR CONTENIDOS EN UNA REGION DE DNA DE 230 PB (-308 A -79). EL ANALISIS DE FOOTPRINTING IN VIVO DE ESTA REGION REVELO LA EXISTENCIA DE DOS NUCLEOTIDOS DE GUANINA, EN LAS POSICIONES -96 Y -107/-108 QUE ESTABAN PARCIALMENTE PROTEGIDAS DE LA METILACION POR DMS, EN PLANTAS DE TOMATE QUE HABIAN SIDO TRATADAS CON EL MEJA. EL ANALISIS DE LA SECUENCIA DEL DNA INDICABA QUE AMBOS NUCLEOTIDOS DE GUANINA ESTABAN INCLUIDOS DENTRO DE DOS ELEMENTOS O MOTIVOS GAGTA SEPARADOS POR 6 O 7 PB. LOS ENSAYOS DE RETAR