Caracterizacion y regulacion de la expresion del gen ald de escherichia coli
- Autores: Elena Hidalgo Hernando
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 1991
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Fausto García Hegardt (presid.), Albert Boronat (secret.), Laura Baldoma (voc.), Martí Aldea Malo (voc.), Josep Casadesús Pursals (voc.)
- Materias:
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- Resumen
EL GEN ALD ESTA SITUADO EN EL MINUTO 31 DEL CROMOSOMA DE E. COLI Y CODIFICA LA PROTEINA ALDH. ESTA ACTIVIDAD ENZIMATICA ESTA INVOLUCRADA EN DISTINTAS RUTAS METABOLICAS Y SE ENCUENTRA SOMETIDA A UN FUERTE CONTROL TRANSCRIPCIONAL A TRES NIVELES: PRESENCIA DE MOLECULAS INDUCTORAS ESPECIFICAS; CONTROL RESPIRATORIO (SE EXPRESA EN AEROBIOSIS); Y REPRESION CATABOLICA (DEPENDIENTE E INDEPENDIENTE DE CAMP).
SE DESCRIBE EN ESTE TRABAJO LA CLONACION Y CARACTERIZACION DEL GEN ALD DE E. COLI SIGUIENDO LA ESTRATEGIA DE COMPLEMENTACION DE UNA CEPA MUTANTE ALDH DEFICIENTE CON UNA GENOTECA EN PLASMIDO DE LA CEPA SALVAJE. LA SECUENCIACION DE UN FRAGMENTO GENOMICO DE 3'7 KB CONTENIDO EN UNO DE LOS PLASMIDOS AISLADOS REVELO LA EXISTENCIA DE TRES MARCOS DE LECTURA ABIERTOS (ORF1, ORF2 Y ORF3). UNO DE ELLOS, EL ORF1, FUE IDENTIFICADO COMO GEN ALD, MEDIANTE SECUENCIACION DEL EXTREMO N-TERMINAL DE LA PROTEINA ALDH PURIFICADA Y COMPARACION CON LA SECUENCIA DE AMINOACIDOS DERIVADA DEL EXTREMO 5' DEL ORF1.
SE CARACTERIZO ESTRUCTURALMENTE EL GEN ALD (COMPARACION CON OTRAS ALDH, SITUACION EN EL CROMOSOMA DE E. COLI...) Y EL TRANSCRITO ESPECIFICO (ENSAYOS DE EXPRESION DE ALD POR "NORTHERN BLOT", DETERMINACION DEL PUNTO DE INICIO DE LA TRANSCRIPCION POR "PRIMER EXTENSION", DETERMINACION DE SEÑALES DE TERMINACION...), Y SE ESTUDIO LA REGION DEL PROMOTOR DE ALD, DETERMINANDOSE LA EXISTENCIA EN EL MISMO DE CUATRO DOMINIOS DE UNION A FACTORES TRANS.
SE ESTUDIO IGUALMENTE LA POSIBLE INVOLUCRACION DE LOS ORF2 Y ORF3 EN FUNCIONES DE CONTROL DEL GEN ALD QUE CODIFICA PARA LA ALDEHIDO DESHIDROGENASA DE E. COLI.
