Resumen de Estructura de la cromatina en zonas flanqueantes de dos genes del maiz (zea mays)
MEIDANTE EL USO DE ENDONUCLEASAS INESPECIFICAS SE HA DEMOSTRADO QUE LA CROMATINA DE GENES QUE SE TRANSCRIBEN ACTIVAMENTE PRESENTA UNA ESTRUCTURA DIFERENTE, MANIFESTADA EN SU ESPECIAL SENSIBILIDAD AL LA DIGESTION CON ESTOS ENZIMAS. SE HA ESTUDIADO LA ESTRUCTURA DE LA COMATINA QUE PRESENTAN DOS GENES DE EXPRESION ESPECIFICA DE MAIZ EN FUNCION DE SU ACTIVIDAD TRANSCRPCIONAL.
ANTES DE INICIAR ESTOS ESTUDIOS FUEN NECESARIO CARACTERIZAR TANTO EL PATRON DE EXPRESION GENICA COMO EL PATRON DE RESTRICCION GENOMICO, PARA ELLO SE REALIZARON EXPERIMENTOS DE NORTHERN, RUN-ON Y SOUTHERN, UTILIZANDO COMO SONDAS FRAGMENTOS DE LOS GENES ESTUDIADOS MARCADOS RADIACTIVAMENTE. TAMBIEN FUEN NECESARIO PONER A PUNTO LAS TECNICAS DE AISLAMIENTO DE NUCLEOS DE DISTINTOS TEJIDOS Y ORGANOS DEL MAIZ.
EL PRIMER NIVEL EN LA CARACTERIZACION DE LA ESTRUCTURA DE LA CROMATINA FUE LA DETERMINACION DEL TAMAÑO DE LA UNIDAD REPETITIVA DE LA CROMATINA D ELOS TEJIDOS UTILIZADOS.
UTILIZANDO COMO NUCLEASAS INESPECIFICAS LA NUCLEASA MICROCOCAL Y UNA NUCLEASA ENDOGENA PRESENTE EN LOS EXTRACTOS NUCLEARES DE PRIMORDIOS FOLIARES SE PUDO DETERMINAR LA PRESENCIA DE UNA SENSIBILIDAD GENERAL DE LA CROMATINA DE LOS GENES CUANDO ESTOS ESTABAN EN ESTADO TRANSCRIPCIONALMENTE ACTIVO.
UTILIZANDO TANTO LA NUCLEASA ENDOGENA PRESENTE EN LOS PRIMORDIOS FOLIARES, COMO LA NUCLEASA DNASA I SE HAN LOCALIZADO PUNTOS DE ESPECIAL SENSIBILIDAD EN LAS ZONAS 5' DE LOS GENES ANALIZADO, SIGNIFICANDO PUNTOS EN LOS QUE LA ESTRUCTURA DE LA COMATINA PRESENTA UNA ALTERACION LOCAL CORRELACIONADA CON EL ESTADO TRANSCRIPCIONAL DE LOS GENES.
SE HA ANALIZADO LA POSIBILIDAD DE QUE ALGUNO DE ESTOS PUNTOS HIPERSENSIBLES SE DEBIERA A LA PRESENCIA DE SECUENCIAS DE DNA CON UNA CONFORMACION ALTERADA, MEDIANTE ESTUDIOS DE SENSIBILIDAD A NUCLEASA ESPECIFICAS DE CADENA SIMPLE EN PLASMIDOS SUPERHELICOIDALES QUE CONTENIANA LAS SECUENCIAS PROMOTORAS DE LOS GENES, DETECTANDOSE EN UNO DE ELLOS UN PUNTO HIPERSENSIBLES
