Aislamiento y caracterizacion de clones genomicos codificantes para proteinas de reserva del maiz (zea mays l.)

• Autores: Manuel Reina del Pozo
• Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 1989
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Mercè Durfort i Coll (presid.), Joan Rigau Lloveras (secret.), Miquel Llobera Sande (voc.), Enrique Querol Murillo (voc.), Luis Cornudella Mir (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
  • Ciencias de la vida
    • Genética
      • Ingeniería genética
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• Resumen

  • SE HAN LOCALIZADO TRES CLONES GENOMICOS DE UNA GENOTECA DE DNA DE ENDOSPERMO DE MAIZ CONSTRUIDA POR RESTRICCION PARCIAL SAU3AI Y CLONAJE EN LA DIANA BAMHI DEL VECTOR LAMBDA CHARON-35 POSITIVOS A UN CLON CDNA PME119 QUE CODIFICA PARA UNA GLUTELINA-2 DE 28 KD, PROTEINA DE RESERVA DEL MAIZ. LOS TRES INSERTOR SOLAPAN CUBRIENDO UNA REGION DE GENOMA DE 18.5 KBP. CUANDO SE ALINEAN CON UN CLON GENOMICO PREVIAMENTE AISLADO EN EL LABORATORIO (ZG1) ESTA REGION GENOMICA CUBRE 20 KBP. LA REGION CODIFICANTE SE LOCALIZA CENTRADA, INCLUIDA EN UN FRAGMENTO DE RESTRICCION HINDIII-HIND III DE 3.O KBP. SUBCLONADO ESTE EN PLASMIDOS DE ELEVADO NUMERO DE COPIAS COMO PUC18 SE ESTABLECIO UN MAPA DE RESTRICCION. EN LOS TRES AISLAMIENTOS ESTE ERA PLENAMENTE COINCIDENTE. LA SECUENCIA COMPLETA DE UNO DE LOS FRAGMENTOS, CLONADO EN EL PLASMIDO P268C, DE 2975 BP PERMITIO CONOCER 1709 BP DE REGION FLANQUENATE A 5', LA TOTALIDAD DE LA REGION CODIFICANTE Y UNOS 600 BP DE LA REGION 3' FLANQUEANTE. LA COMPARACION DE ESTA SECUENCIA CON OTRAS OBTENIDAS EN EL LABORATORIO, ESPECIALMENTE CON LOS CLONES CDNA DESCRITOS EN LA VARIEDAD E10 MUESTRAN IDENTIDAD CON LA EXCEPCION DE POCAS MUTACIONES PUNTUALES QUE NO PRODUCEN, CON UNA UNICA EXCEPCION CAMBIOS DEL AMINOACIDO CODIFICADO.

    SE CONTRUYO UNA GENOTECA PARCIAL DE DNA DE ENDOSPERMO DE MAIZ DE LA VARIEDAD W64A A PARTIR DE LOS FRAGMENTO DE DNA HINDIII-HINDIII DE TAMAÑOS COMPRENDIDOS ENTRE 3.5 Y 4.5 KBP CON LA FINALIDAD DE AISLAR CLONES GENOMICOS CODIFICANTES PARA UNA ZEINA-II DE 16 KD (ZC1). A PARTIR DE ESTA, EMPLEANDO LA SONDA PSTI-BAMHI DE 300 BP DE PME177 SE AISLARON 5 SEÑALES POSITIVAS, CUYOS INSERTOS RESULTARON IDENTICOS. LA SECUENCIACION DE LA TOTALIDAD DEL INSERTO (3870 BP) PERMITIO CONOCER 1238 BP DE SECUENCIA FLANQUEANTE 5' Y 2038 BP DE REGION FLANQUEANTE 3'. SE TRATA DEL PRIMER AISLAMIENTO GENOMICO DE PROTEINAS DE RESERVA DE CEREALES EN QUE SE OBSERVA UNA COINCIDENCIA COMPLETA ENTRE LA SECUENCIA DEL GEN Y DEL CDNA,