Mejora de cultivos in vitro de hibridomas mediante el desarrollo de un sistema de perfusión y la inhibición de la muerte celular programada

• Autores: Albert Tintó
• Directores de la Tesis: Francesc Gòdia Casablancas (dir. tes.), Jordi Joan Cairó Badillo (codir. tes.)
• Lectura: En la Universitat Autònoma de Barcelona ( España ) en 1999
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Carles Solà i Ferrando (presid.), Emilio Montesinos Seguí (secret.), Jordi Vives Puiggrós (voc.), Ferran Azorín Marín (voc.), Eduard Montanya Mías (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología celular
      • Cultivo celular
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• Resumen

  • En este trabajo se aborda el problema de la optimización de cultivos in vitro de células animales desde dos perspectivas diferentes. De un lado se intenta aplicar una estrategia de cultivo en perfusión, en la que las celulas están retenidas en el interior de el reactor mediante un sistema de inmovilización y se cultivan con un aporte constante de medio, de manera que se garantiza la presencia de los diferentes nutrientes esenciales a unas concentraciones adecuadas para la célula y se consigue eliminar los diferentes subproductos celulares que pueden resultar tóxicos,consiguiendo así unas condiciones lo más parecidas posible a las que tendría la celula in vivo. Para llevar a cabo esta labor se ha seleccionado inicialmente un sistema de inmovilización con unas caracteristicas fisicas adecuadas y que no fuera tóxico para las células, las microcápsulas de alginato cálcico, y seguidamente se ha implementado un sistema de cultivo en perfusión en un reactor de lecho fluidizado. A partir de los resultados obtenidos se ha podido constatar que esta estrategia de cultivo permite obtener elevadas concentraciones celulares durante periodos de tiempo superiores a un mes.

    De todas maneras se ha podido observar que una vez se alcanza una determinada concentración celular en el interior de las microcápsulas, las células empiezan a morir por la presencia de concentraciones excesivamente bajas de alguno de los nutrientes del medio, concretamente de alguna proteína de elevado peso molecular presente en el suplemento de suero fetal bovino, que difunde demasiado lentamente a través de la pared de la microcápsula.

    Este hecho planteó la necesidad de iniciar una segunda parte del trabajo donde se intentaba conocer los mecanismos que llevan a las célula a entrar en la fase de muerte celular.

    En esta segunda parte del trabajo se ha podido determinar que las células mueren por apoptosis(muerte celular programada) en condiciones de limitaci