Optimización de la maduración oocitaria in vitro y de la inyección intracitoplasmática de espermatozoides en porcino

• Autores: Javier Alfonso Grasa
• Directores de la Tesis: Miguel Angel Silvestre Camps (dir. tes.), Fernando García Ximénez (tut. tes.)
• Lectura: En la Universitat Politècnica de València ( España ) en 2009
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Jesús Yániz Pérez de Albéniz (presid.), Inmaculada Molina Botella (secret.), Rita Pilar Cervera Juanes (voc.), Pilar Santolaria Blasco (voc.), María José Escribá Pérez (voc.)
• Materias:
  • Ciencias agrarias
    • Producción animal
      • Porcinos
      • Reproducción
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• Resumen

  • El desarrollo de un sistema de producción in vitro de embriones que puedan desarrollarse a término tras su transferencia de manera eficiente, contribuiría a un mejor entendimiento de la fisiología del desarrollo embrionario al principio de la gestación, al desarrollo de otras tecnologías embrionarias como la criopreservación de gametos o embriones y la producción de porcinos modificados genéticamente, como donantes de órganos para xenotrasplantes, a su aplicación como modelo para el estudio de la etiología, patogénesis y posible terapia de enfermedades humanas, además de la producción de proteínas específicas a través de animales transgénicos. El planteamiento inicial fue intentar desarrollar un sistema de obtención de oocitos lo más competente posible que diera lugar a zigotos monospérmicos mediante técnicas de fecundación in vitro. Por ello, el objetivo general de esta tesis ha perseguido optimizar los sistemas de maduración in vitro de oocitos de porcino y la producción de embriones mediante la inyección intracitoplasmática de espermatozoides. Para ello, se abordaron aspectos como la concentración espermática en la fecundación in vitro para reducir la alta fecundación polispérmica propia del modelo porcino, sin embargo resultó ser ineficiente. De esta forma, se planteó la inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) como una posible alternativa para la producción de zigotos monospérmicos. También se abordó la suplementación hormonal durante la maduración in vitro, donde las gonadotrofinas de origen humano (recombinantes) resultaron una opción válida e igualmente eficientes que las de origen animal (PMSG y hCG) en embriones obtenidos mediante fecundación in vitro, ICSI y activación partenogenética. Para optimizar al máximo los recursos del laboratorio, planteamos ampliar el periodo de micromanipulación de oocitos a toda la jornada laboral (mañana/tarde), para aumentar el número de efectivos por repetición, analizando tanto la maduración nuclear oocitaria como la capacidad de desarrollo in vitro posterior de embriones porcinos obtenidos con diferentes procedimientos (ICSI y partenogenéticos), lo que se consiguió asumiendo el envejecimiento fisiológico de los oocitos in vitro, ya que la utilización de inhibidores reversibles de la meiosis no tuvo efecto.