Vehiculización de compuestos metálicos hacia células tumorales mediante conjugación a análogos de octreotide
- Autores: Flavia Barragán Clavero
- Directores de la Tesis: Vicente Marchan Sancho (codir. tes.), Virtudes Moreno Martínez (codir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2011
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Fernando Albericio Palomera (presid.), Patricio Gámez Enamorado (secret.), José Ruiz López (voc.)
- Materias:
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- Resumen
La metodología de síntesis de péptidos en fase sólida, en combinación con la ciclación mediante la reacción de metátesis de cierre de anillo e hidrogenación del doble enlace resultante, es una estrategia eficiente para la síntesis de conjugados metalados de análogos dicarba de octreotide. El tratamiento ácido final necesario para la escisión del péptido de la resina y la eliminación de los grupos protectores de las cadenas laterales de los aminoácidos no afecta a la estabilidad del fragmento metálico del conjugado. Las condiciones estándar de activación de aminoácidos mediante el uso agentes acoplantes (carbodiimidas, sales de fosfonio o de uronio) y aditivos (NHS, HOBt o HOAt) son perfectamente compatibles con la incorporación de complejos metálicos de Pt(II) y Os(II) ([PtCl2Dap] y [(¿6-Bifenilo)OsCl(pico)], respectivamente) empleados sobre las diferentes peptidil-resinas, lo que ha permitido su incorporación cuantitativa. Esta metodología de síntesis también ha permitido la obtención de diversos conjugados rutenados a través de la coordinación de un precursor del complejo de Ru(II) [(¿6-p-Cym)RuCl(PPh3)(ImB)]+, [(¿6-p-Cym)RuClDap]+) a un ligando adecuado (monodentado o bidentado), previamente incorporado en la peptidil-resina. En su conjunto, ambas aproximaciones de síntesis lineal en fase sólida permiten, además, la incorporación regioselectiva del fragmento metálico en la secuencia peptídica, conduciendo a un único regioisómero.
Siguiendo esta metodología, se ha sintetizado una biblioteca de conjugados metalados de análogos dicarba de octreotide. Todos los conjugados muestran una gran estabilidad en medio acuoso, lo que se atribuye a la sustitución del enlace disulfuro en el péptido original por sus isósteros metileno o etileno. En los diferentes estudios realizados con un conjugado representativo de cada familia (R-C3L2, C5, C6 y C8), únicamente se ha detectado la hidrólisis del enlace M-Cl (excepto en el caso de C5), reacción que ha sido muy dependiente de la concentración de ión cloruro presente en el medio (100, 22.6 o 4 mM). Ello demuestra que se puede modular la activación de los complejos metálicos a través de la selección adecuada de los ligandos en torno al metal y que, una vez formada la especie acuatizada del complejo metálico, no existen reacciones secundarias intramoleculares con el fragmento peptídico.
La conjugación al péptido tampoco altera la capacidad de los diferentes complejos metálicos de interaccionar con el DNA, formándose aductos monofuncionales (conjugados que incorporan los areno complejos de rutenio y osmio, C6 y C8, respectivamente) o bifuncionales (conjugados de platino, C2 y R-C3L2) esperados según la estructura de cada complejo metálico. En cambio, el conjugado de rutenio que incorpora el ligando trifenilfosfina (C5) no interacciona con el DNA, resultado coherente con la nula hidrólisis del enlace Ru-Cl en medio acuoso, incluso en ausencia de ión cloruro. En todos los aductos DNA-metal-péptido, se ha confirmado la gran preferencia por la unión del metal (Pt, Ru y Os) al N7 de las guaninas y, en particular, hacia la situada en el extremo 5¿ de la secuencia 5¿d(CATGGCT).
Los ensayos biológicos realizados tanto con los conjugados más representativos como con los complejos metálicos control, han revelado que la actividad citotóxica decae significativamente como consecuencia de la conjugación entre ambos fragmentos. Sorprendentemente, el único conjugado con actividad antitumoral (IC50= 63.00 ¿ 1.53 en células tumorales MCF-7 e IC50= 26.00 ¿ 3.46 en células tumorales DU-145) es precisamente el que no se activa por hidrólisis acuosa ni interacciona con el DNA, lo cual sugiere que su mecanismo de acción no transcurriría a través de la unión covalente al DNA. El hecho de que la internalización de P3 sea mayor en células con altos niveles de expresión del subtipo 2 de receptores de somatostatina, unido a que la actividad antitumoral del conjugado C5 sea dependiente de dicho porcentaje de expresión, permite concluir que este derivado dicarba de octreotide es un buen vehiculizador de agentes citostáticos basados en metales de transición.
