Resumen de Implicación de ptov1 (prostate tumor overexpressed-1) en la regulación de la vía de notch en el cáncer de próstata
El gen PTOV1 (Prostate tumor overexpressed-1) se sobrexpresa en cáncer de próstata (CP) y se asocia significativamente a un elevado índice Ki67 en tumores. Lesiones pre-neoplásicas de HGPIN (High grade PIN) asociadas a tejido canceroso también muestran elevados niveles de la proteína PTOV1. Además la detección de PTOV1 en estas lesiones de HGPIN provenientes de biopsias prostáticas predice un cáncer de próstata asociado, a pesar de la ausencia de lesiones cancerosas visibles, convirtiéndolo en un potencial marcador en el diagnóstico precoz del cáncer de próstata. La sobreexpresión de proteína PTOV1 induce la entrada en fase S del ciclo celular y por tanto la proliferación . Estos resultados sugieren una función para PTOV1 en el desarrollo y progresión del CP. Para estudiar la función de PTOV1 en la progresión del cáncer estudiamos sus interacciones funcionales con vías de señalización implicadas en progresión tumoral como es la vía del receptor Notch. Esta vía regula procesos como son diferenciación celular, proliferación y crecimiento y en CP no queda claro si tiene un papel oncogénico o supresor tumoral. La manipulación de la expresión de PTOV1 confirmó su efecto represor sobre la expresión de los genes target de Notch: Hes-1 y Hey-1 y sobre la actividad transcripcional de Notch sobre éstos. Después de estos resultados, demostramos que PTOV1 interacciona con el represor de Notch ya descrito Silence Mediator of Retinoic acid and Thyroid hormone receptor (SMRT), tanto por inmunolocalización como por ensayos de interacción pull-down in vitro. Observamos que ambas proteínas se translocan a núcleo cuando inhibíamos la actividad del complejo de la ¿-secretasa, y por tanto la activación del receptor Notch, mediante el tratamiento con DAPT. Además, demostramos, que PTOV1 interacciona con otros componentes presentes en el complejo represor de Notch, como son NCoR, RBP-Jk y HDAC-1 y -4. También pudimos demostrar, mediante experimentos de inmunoprecipitación de chromatina (ChIP), que PTOV1 estaba siendo reclutado junto con componentes del complejo represor de Notch en los promotores de los genes dianas Hey-1 y Hes-1. Pero esto era detectado únicamente cuando el receptor Notch no era activo. En condiciones de activación del receptor Notch, el reclutamiento de PTOV1 a dichos promotores no ocurría.
Observamos además que la activación de la vía de Notch disminuía los niveles de proteína tanto de PTOV1 como de SMRT y, en cambio, los niveles de sus respectivos mRNAs no se veían afectados. Los resultados del tratamiento con inhibidores de proteasoma sugieren que la disminución de los niveles de proteína PTOV1 por las formas activas de Notch, no depende de la actividad del proteasoma.
Usando los promotores Hes1 y Hey1 unidos al gen reporter Luciferasa y mediante el tratamiento con el inhibidor de la actividad deacetilasa, TSA, pudimos demostrar que la acción represora de PTOV1 sobre la actividad transcripcional de Notch requiere la acción de las Histona deacetilasas (HDACs), A nivel del mRNA PTOV1 se sobrexpresaba en tumor respecto a tejido normal adyacente. Por el contrario la expresión de Hey-1 era significativamente menor en tumor, con lo que obtuvimos una correlación inversa y significativa entre la expresión de los dos genes. En cuanto al gen Hes-1, no se observaron diferencias significativas entre tejido normal y tumoral. Se corroboraron estos resultados a nivel de proteína mediante inmunohistoquímicas en muestras de cáncer de próstata y de metástasis a ganglios linfáticos, y el conjunto de resultados de este apartado, sugieren que PTOV1 se comporta como supresor de la vía de señalización de Notch.
En resumen con esta tesis aportamos evidencias de que, por un lado, la vía de Notch participa en la progresión del cáncer de próstata siendo una de las principales dianas el gen Hey1 significativamente inhibido en el cáncer con respecto al tejido normal adjyacente. Por otra parte, PTOV1 actúa como represor de la vía de Notch, inhibiendo la expresión de los genes diana canónicos, Hes1 y Hey1, por lo menos en parte, formando un complejo con los corepresores SMRT/NCoR y las HDACs en los promotores de estos genes.
