Shiga toxin 2-enconding phages: prevalence in food environment and mechanisms of induction (bacteriófagos portadores de la toxina shiga 2: prevalencia en los alimentos y en el medio ambiente y mecanismos de inducción)
- Autores: Lejla Imamovic
- Directores de la Tesis: María Teresa Muniesa Pérez (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2011
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Anicet R. Blanch (presid.), Teresa Llovet Pellejero (secret.), Stefano Morabito (voc.)
- Materias:
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- Resumen
Escherichia coli productoras de la toxina Shiga (STEC) puede provocar enfermedades que varían desde una diarrea no complicada hasta una colitis hemorrágica y síndrome de uremia hemolítica. Las fuentes principales de infección por estos patógenos son los alimentos y aguas contaminadas. Un amplio espectro de los serotipos que están implicados en infecciones en humanos, ha sido identificado. La toxina Shiga (Stx) producida por STEC es su principal factor de virulencia. Los genes stx se encuentran codificados en el genoma de bacteriófagos de tipo lambdoide (fagos Stx). La inducción y la regulación de fagos Stx están directamente implicadas en la producción de la toxina y, debido a eso, también en la patogenicidad. El método basado en PCR a Tiempo Real ha sido utilizado para cuantificar el número de copias del gen stx en la fracción vírica de los bacteriófagos extraídos. El número de las partículas víricas detectada por la microscopia electrónica y el numeró de los fagos infectivos esta relacionado con el número calculado por PCR en Tiempo Real. El método basado en PCR a Tiempo Real permitió detección de la presencia de los fagos Stx en medio ambiente. Un total de 150 muestras, incluyendo las muestras de aguas residuales y las muestras fecales de humanos y animales diversos han sido analizadas para la presencia de los fagos libres en medio ambiente. La presencia de fagos Stx ha sido detectada en 70 % de las muestras de aguas residuales de origen humano. Ochenta y nueve por ciento de las muestras fecales de origen bovino eran positivas para la presencia de fagos Stx y 31,8% de otras muestras fecales de otro origen.Los resultados obtenidos en este estudio demuestran que fagos Stx se encuentran ampliamente distribuidos en ambientes contaminados con materia fecal. Fagos Stx también se detectaron en ensalada y carne picada de ternera. Los resultaron por PCR a Tiempo Real indican la presencia de fagos Stx en un 68,7% de muestras de ensalada. Para evaluación de la infectividad de los fagos Stx en muestras, los fagos han sido propagados en E. coli C600, O157:H7 y Shigella sonnei. Cincuenta por ciento de las muestras han sido positivas por presencia de los fagos infectivos. En el próximo capitulo se ha evaluado la frecuencia de transducción de stx en ensalada, carne de vacuno, leche, zumo y agua. Uno de los factores más importantes para la transducción fue la temperatura. La transducción corrió en todas muestras de alimentos (excepto las muestras de zumo) y agua en 37º C y 25ºC. La transducción no han sido detectada en muestras con baja pH y tampoco incubando las muestras a bajas temperaturas. Un mínimo de 103 a 104 UFC ml-1 de las bacterias era necesario para transducción. El objetivo del próximo capitulo de la tesis fue investigar el efecto de EDTA en la inducción del fago Stx2 independiente de RecA. Los resultados mostraron las diferencias en el número de fagos Stx2 presentes en los cultivos de las cepas lisogenizadas con el mismo fago Stx2 (fago 933W). La inducción con EDTA en la cepa recA-negativa indicó que la inducción por EDTA no era dependiente de RecA. Nuestros resultados indicaron que el pH afectó el nivel de la inducción del fago 933W, tanto si ésta es espontánea, en presencia de mitomicina C o en presencia de EDTA. RecA en el fago lambda (RcsA y DsrA) y, por otro lado, los tres sistemas de respuesta al estrés a nivel de la membrana bacteriana que se han descrito que se activan en presencia de EDTA (CpxAR, RcsBC y BaeSB). En el siguiente paso, se evaluó el hecho que la inducción pudiera depender de un efecto de quelación. Los resultados obtenidos sugieren que el efecto quelante es el factor que influye en la inducción de los fagos Stx y la causa del efecto mostrado por EDTA.
