Rna interference as anti-hiv-1 therapy and a tool to find novel cellular host factors (arn interferent com a terapia contra el vih-1 i eina per a trobar nous factors cel·lulars)

• Autores: Jordi Senserrich Velasco
• Directores de la Tesis: José Andrés Esté Araque (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2009
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Josefa Mallol Montero (presid.), Christian Brander (secret.), Lluís Armengol Dulcet (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
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• Resumen

  • En la presente tesis se han empleado diversas estrategias basadas en la interferencia por ARN (en inglés RNAi, de RNA interference) para inhibir la infección por el VIH-1 así como para definir factores celulares implicados en el ciclo de replicación de este virus. Se ha llevado a cabo con éxito un pequeño cribaje basado en shRNA (del inglés short-hairpin RNA) de factores celulares implicados en la replicación y patogénesis del VIH-1, apuntando a un papel del los factores celulares p53 y Cdk1 en el ciclo vital del VIH-1. Se ha optimizado la aplicación de un cribaje basado en la transfección de siRNAs (del inglés small-interfering RNA) en linfocitos primarios y células MT-4. No obstante, se ha demostrado que usando múltiples siRNAs la eficiencia de silenciamiento génico es muy variable, y la evaluación de la infección por el VIH-1 en células MT-4 tratadas con siRNAs solo ha sido capaz de detectar aquellos factores que alteran fuertemente la replicación del virus. A pesar de la actividad anti-VIH-1 de shRev/Env y el hecho que la región diana está altamente conservada en diversas cepas del VIH-1, se ha demostrado que el virus puede escapar de esta inhibición sin verse alteradas sus capacidades replicativas y sensibilidades a drogas antivirales. Las mutaciones responsables de la resistencia al shRev/Env se hallan localizadas dentro de la secuencia diana del shRNA, y se ha mostrado que se requieren dos mutaciones para escapar completamente de la inhibición mediada por RNAi. Se ha confirmado el papel de p53 en la infección por el VIH-1 mediante RNAi como factor cooperador en la transcripción del LTR, pero también está implicado en la muerte inducida por la envuelta del virus, sugiriendo una doble función de p53, por un lado a nivel transcripcional y por otro en la vía apoptótica inducida por el VIH-1. La influencia de ZNRD1 en la infección por VIH-1 ha sido confirmada, dado que RNAi contra este factor ha inhibido la replicación del virus. Nuestros datos sugieren un mecanismo de acción de ZNRD1 probablemente a un nivel post-integración. Además, los estudios de asociación genética han identificado polimorfismos y un haplotipo de ZNRD1 significativamente asociados a la progresión diferencial del VIH-1. En conclusión, nuestro trabajo ha demostrado la utilidad del RNAi contra la replicación del VIH-1 y para elucidar el papel de factores celulares en la infección por el VIH-1.