Resumen de Caracterización de cepas fúngicas degradadoras de celulosa. Estudio de la beta-glucanasa cel12a de stanchybotrys atra bp-a
Se han identificado 3 nuevas cepas fúngicas degradadoras de celulosa: Penicillium sp. CR-313, Penicillium sp. CR-316 y Stachybotrys atra BP-A. Las 3 cepas secretaron máxima actividad celulasa al medio de cultivo al crecer en medio mínimo suplementado con paja de arroz al 1%, mientras que la glucosa reprimió completamente la secreción de actividad celulasa al medio de cultivo. La celulasa cruda secretada por Stachybotrys atra BP-A mostró elevada termoresistencia y resistencia a pH alcalinos, hecho que facilitaría su aplicación en procesos biotecnológicos.
El gen cell2A, que codifica la p-glucanasa Cell2A de Stachybotrys atra BP-A fue clonada y correctamente expresada en 4 huéspedes heterólogos distintos: Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae, Aspergills nigery Aspergillus nidulans. Dicha proteína fue correctamente secretada al medio de cultivo por S. cerevisiae, A. nigery A. nidulans, evidenciando el correcto reconocimiento del péptido señal de Cell2A de Stachybotrys atra BP_A por la maquinaria secretora de los huéspedes utilizados. De entre los 3 huéspedes, A. nigerfue el que secretó mayor cantidad de enzima recombinante por lo que la enzima fue purificada y caracterizada a partir de cultivos de este organismo. En cambio, la proteína se acumuló, probablemente en forma de cuerpos de inclusión, al expresarla en E. coli.
La enzima mostró un peso molecular de 24 kDa y un punto isoeléctrico de 8,2. Al analizar la especificidad de sustrato de la enzima se observó que Cell2A es una p-(l,3)-(l,4)-glucanasa con elevada actividad sobre p-glucano de cebada y liquenano. La enzima presenta reducida capacidad para hidrolizar CMC y no es activa sobre celulosa cristalina ni laminarían.
Se estudió la regulación de la expresión génica de cell2A mediante amplificación por RT-PCR y Real Time PCR. Los resultados mostraron que la paja de arroz fue el mejor inductor de la expresión génica de cell2A de Stachybotrys atra BP-A, la expresión por lactosa fue menor mientras que la glucosa reprimió completamente la expresión de cell2A.
