Estudio del enhancer del promotor principal inmediatamente temprano del citomegalovirus humano y su modulación por los factores de transcripción celulares nf-kb y ap-1
- Autores: Montserrat Gustems Viñas
- Directores de la Tesis: Ana Angulo Aguado (dir. tes.), Rosa Aligué Alemany (codir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2008
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Albert Bosch Navarro (presid.), Francesc Tebar Ramón (secret.), Miguel Ángel Martínez de la Sierra (voc.), Carme Caelles Franch (voc.)
- Materias:
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- Resumen
Las proteínas principales inmediatamente tempranas (MIE) del citomegalovirus (CMV) humano son de gran importancia para la replicación viral. Por este motivo, existe un gran interés en conocer la regulación de su promotor, el MIEP. En esta tesis se ha analizado la relevancia de la región del enhancer del MIEP del CMV humano, así como explorado sus mecanismos de regulación durante la infección viral. El conocimiento de los mecanismos reguladores de este enhancer podría ayudar a identificar nuevas dianas terapéuticas para el tratamiento de la infección por el CMV humano.
En primer lugar, se ha determinado que el enhancer del MIEP del CMV humano es indispensable para las estrategias de replicación de este virus, lo cual indica la presencia en él de elementos reguladores clave. El enhancer del MIEP contiene multitud de sitios de unión para factores de transcripción celulares, entre ellos NF-kB y AP-1, existen además distintas evidencias experimentales y clínicas que indican un posible papel de estos factores de transcripción en la regulación del MIEP durante la infección del CMV. Sin embargo, mientras que la eliminación de los sitios de unión a NF-kB y AP-1 del enhancer del MIEP, bloquea la activación del promotor por dichos factores de transcripción en ensayos in vitro con el promotor aislado, se ha demostrado que estos sitios no son necesarios durante la replicación viral o la expresión de las proteínas MIE en las condiciones analizadas en diferentes sistemas celulares en cultivo.
Debido a la alta especificidad de especie que presenta el CMV, otro de los objetivos de este trabajo ha sido el establecimiento de un modelo animal para el estudio de la regulación del enhancer del MIEP del CMV humano durante la infección in vivo. Para ello se ha generado un CMV murino con el enhancer del MIEP nativo sustituido por el del CMV humano (hMCMV-ES), mediante el cual se ha observado que el enhancer del CMV humano es capaz de sustituir funcionalmente en gran medida al del CMV murino. Sin embargo, el hMCMV-ES presenta cierta atenuación en ratones Balb/c inmunocompetentes, dificultando el análisis de los mecanismos de control del enhancer del CMV humano durante la infección in vivo. Por este motivo se ha recurrido al modelo de los ratones Balb/c neonatos, que por poseer un sistema inmune inmaduro son más sensibles a la infección por el CMV. Usando este modelo animal se establecieron unas condiciones experimentales en las que el hMCMV-ES replica durante la infección aguda y se reactiva del estado de latencia con unos niveles similares a los del CMV murino. De modo que se han establecido unas condiciones experimentales que permiten el análisis de los elementos presentes en el enhancer del MIEP del CMV humano durante una infección in vivo utilizando el recombinante hMCMV-ES. Hasta el momento se han estudiado los elementos de unión a NF-kB y AP-1 del enhancer del MIEP, observándose que la replicación viral durante la infección aguda y la reactivación del estado latente no se ven afectadas al eliminar estos elementos. Estos datos indican la flexibilidad y la robustez asociadas a la regulación de este enhancer.
Por último, la predicción de un elevado número de sitios potenciales de unión a AP-1 en los genomas de los CMVs humano y murino abre las puertas al estudio de la regulación de distintos genes virales por este factor de transcripción. En este sentido, se ha visto que en ausencia de la quinasa JNK, una de las quinasas activadoras de este factor de transcripción, ambos CMVs presentan una disminución significativa en los niveles de replicación en fibroblastos en cultivo.
