Resumen de Caracterización de virus patógenos de leguminosas transmitidos por pulgones
Vilma Jannette Ortiz Cortés
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) ha incrementado su uso en el diagnóstico molecular de virus de plantas, principalmente es una herramienta de gran utilidad para la detección de virus confinados al floema, como es el caso de los miembros de la familia Luteoviridae. En esta tesis se ha confirmado mediante la RT- PCR, la presencia del virus del enrollado de la hoja de la judía, Bean leaf roff virus (BLRV) en España, se ha puesto a punto un procedimiento en la extracción de ácidos nucleicos basado en el uso del LICI y la metodología a seguir como técnica de rutina para su diagnóstico en el huésped y vector. En ensayos de transmisión con pulgones observamos una dependencia del cultivar utilizado como fuente de inóculo. La detección de BLRV en Aphis fabae demostró que esta especie fue capaz de adquirirlo aunque no haya sido capaz de trasmitirlo. La dispersión en España de BLRV es amplia se detecto en todas las zonas productoras de leguminosas para grano muestreadas. En muestreos realizados en cultivos de haba cv. Muchamiel, en la comunidad autónoma de Murcia detectamos por primera vez en España la presencia del virus del amarilleamiento necrótico del haba, Faba bean necrotic yellow virus (FBNYV), en plantas presentando necrosamiento en los bordes de las hojas y amarilleamiento. FBNYV fue detectado y caracterizado mediante ELISA-TAS, IC-PCR y secuenciación de fragmentos de su genoma. Inspecciones posteriores en otras comunidades españolas (Andalucía, Castilla y León y Extremadura) y huéspedes (haba forrajera, garbanzos) demostraron que hasta el momento, FBNYV se localiza únicamente en Murcia. Muestreos periódicos durante un ciclo del cultivo de haba cv. Muchamiel,(octubre/1999 a enero/2000), reflejaron que no hay un claro avance de la enfermedad dentro de un mismo campo o hacia campos aledaños. la infección mixta de FBNYV con TSWV y Potyvirus durante los muestreos 1999 y 2000 demostraron ser frecuentes y los síntomas de necrosamiento en los bordes de las hojas parecían agravarse en las infecciones mixtas. En los ensayos de transmisión por pulgones utilizando como inóculo un aislado español de FBNYV, tanto Acyrtosiphon pisum como Aphis craccivora demostraron ser vectores eficientes en la transmisión de este virus. Los cultivares de haba cv. Aguadulce y Valenciana fueron susceptibles a la infección por FBNYV. La variabilidad de aislados del virus de mosaico amarillo de la judía, Bean yellow mosaic virus (BYMV) y el virus del amarilleamiento de las venas del trébol, Clover yellow vein virus (CIYVV) fue estimada usando la distancia genética como parámetro cuantitativo. En el análisis fueron incluidos aislados de origen español (distinta procedencia geográfica, año de recolección y diferente huésped) y aislados extraídos del banco de genes. Se analizaron secuencias de fragmentos de PCR de 525 nucleótidos correspondiente al extremo carboxilo,del gen de la proteína de la cápsida y parte de la región 3'NCR. de acuerdo a la topología de los árboles filogenéticos, la población de aislados de BYMV es diversa, ya que los aislados se distribuyeron en varios grupos; no obstante, de acuerdo a los valores de diversidad nucleotídica la dinámica de cambios de esta población es baja, siendo la población formada por los aislados españoles más estable que la población de los aislados del banco de genes. En el caso de CIYVV la estabilidad genética parece también ser el mecanismo evolutivo. En BYMV los aislados se separaron por procedencia y no por huésped y año de recolección, con CIYVV la separación coincidía con variaciones biológicas y serológicas de algunos aislados. Los aislados españoles se localizaron junto a aislados clasificados como raza 1. En BYMV los valores de diversidad nucleotídica estimados por fragmento, demostraron ser mayor en la región C-terminal del gen de la CP que en la 3,NCR. En relación con la substitución nucleotídica tanto para la población total de aislados como dentro de cada población de BYMV y CIYVV, la cantidad de cambi s sinónimos fue mayor que la de los no sinónimos, demostrando que la selección negativa es la que está actuando en este fragmento del gen que codifica para la CP.
