Transformacion genetica y busqueda de secuencias promotoras en phycomyces blakesleeanus
- Autores: Jose Arnau Martinez
- Lectura: En la Universidad de Murcia ( España ) en 1989
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: José Ruiz Herrera (presid.), Rosa María Ruiz Vazquez (secret.), Juan Carmelo Gómez Fernández (voc.), María Isabel González Roncero (voc.), Víctor Rubio Susan (voc.)
- Materias:
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- Resumen
EN ESTA TESIS SE HA DESARROLLADO UN SISTEMA DE TRANSFORMACION GENETICA DEL HONGO PHYCOMYCES BLAKESLEEANUS, Y SE HAN AISLADO Y CARACTERIZADO SECUENCIAS PROMOTORAS DE DICHO ORGANISMO. PARA ELLO, SE HA MEJORADO NOTABLEMENTE EL METODO DE OBTENCION Y REGENERACION DE PROTOPLASTOS CON RESPECTO A LOS TRABAJOS PREVIOS. LA UTILIZACION DE NOVOZYM 234 HA PERMITIDO OBTENER FRECUENCIAS DE REGENERACION SUPERIORES AL 60% SOBRE EL NUMERO DE GERMINULAS INICIALMENTE TRATADAS. LA ADICION DEL DNA TRANSFORMANTE SE HA REALIZADO UTILIZANDO LA ENCAPSULACION EN LIPOSOMAS Y LA FUSION DE ESTOS CON PROTOPLASTOS DEL HONGO, O UTILIZANDO DNA LIBRE. EL MARCADOR SELECCIONABLE EMPLEADO HA SIDO LA RESISTENCIA A KANAMICINA DETERMINADA POR EL GEN NPTII DE TN903. LAS FRECUENCIAS OBTENIDAS SON SIMILARES EN AMBOS CASOS Y NO EXCESIVAMENTE ELEVADAS. PARA CONSEGUIR UN AUMENTO DE DICHA FRECUENCIA SE HAN CLONADO (EMPLEANDO EL PLASMIDO PVB32 DE E. COLI) FRAGMENTOS DE DNA DE PHYCOMYCES CAPACES DE PROMOVER LA EXPRESION DEL GEN NPTII DE TN5 QUE NO CONTENIA ORIGINALMENTE SU PROPIO PROMOTOR BACTERIANO. SE HAN CARACTERIZADO 34 PLASMIDOS QUIMERICOS QUE CONTIENEN INSERTOS DE DNA DEL HONGO. SE HAN OBTENIDO CON ELLOS FRECUENCIAS DE TRANSFORMACION SUPERIORES A 3000 TRANSFORMANTES/UG/106 PROTOPLASTOS VIABLES.
SE HA DISEÑADO UN PLASMIDO PMAT100, QUE PRESENTA UNA SERIE DE VENTAJAS PARA SU UTILIZACION EN LA CLONACION POSTERIOR DE GENES. SE HA SUBCLONADO UNO DE LOS PROMOTORES MAS EFICIENTES EN LA TRANSFORMACION DE PHYCOMYCES, OBTENIENDO UN PLASMIDO, PMAT107, QUE TRANSFORMA CON IGUAL EFICACIA QUE EL PLASMIDO ORIGINAL QUE CONTENIA EL MISMO PROMOTOR. POR ULTIMO, SE HAN ENCONTRADO ESTIRPES TRANSFORMANTES ESTABLES E INESTABLES PARA EL CARACTER DE RESISTENCIA A KANAMICINA, INDICANDO QUE ES POSIBLE QUE EL DESTINO DEL DNA TRANSFORMANTE SEA TANTO LA INTEGRACION COMO LA REPLICACION AUTONOMA.
