Resumen de Straoma-mediated drug resistance in colorectal cancer
APARTADO I: La importancia del microambiente tumoral (TME) en la progresión del cáncer y su papel en ei desarrollo de resistencia de novo a terapias dirigidas es cada vez más evidente. Sin embargo, los mecanismos de resistencia a agentes quimioterapéuticos no específicos mediados por el microambiente, como los compuestos platinados o antimetabólitos todavía no han sido esclarecidos.
En esta tesis doctoral, se describen, por primera vez, mecanismos inducidos por los fibroblastos asociados a carcinoma (CAFs) que inducen la translocación de AKT, survivina y P38 al núcleo de las células tumorales. Estos cambios permiten guiar y asegurar !a reparación del ADN y la correcta entrada y salida de la célula en mitosis en presencia de quimioterapia. Se utilizó medio condicionado (CM) proveniente de fibroblastos normales de colon y CAF emparejados para evaluar las curvas de dosis¬respuesta a oxaliplatino y 5 -fluorouracilo, por separado o combinados, en comparación con medio de cultivo estándar (DMEMF12). También se evaluaron ensayos de formación de colonias y de muerte celular para demostrar el papel protector de los medios condicionados de CAF. La técnica de inmunofluorescencia confirmó la translocación de AKT, P38 y survivina al núcleo inducida por los factores solubles de los CAFs. La Inhibición de STAT3 o de P38 podrían ser estrategias viables y prometedoras para superar la resistencia a fármacos mediada por el microambiente. Sin embargo, la inhibición de AKT a través del inhibidor MK2206 indujo un efecto antagonista que promovió una compensación de cMet y STAT3, pudiendo explicar esto el fracaso de los inhibidores de AKT como estrategia para superar la resistencia a quimioterapia.
APARTADO II: Pese a que la quimioterapia preoperatoria (CRT) y la resección mesorrectal son el tratamiento de elección para los carcinomas rectales avanzados, aun hoy es difícil predecir qué pacientes responderán favorablemente al tratamiento. Exploramos cómo diferentes perfiles transcriptómicos del estroma de biopsias rectales antes del tratamiento, pueden ser utilizados para definir un marcador inmunohistoquímico basado en 2 proteínas específicas de CAF para predecir la respuesta al tratamiento neoadyuvante.
El análisis de genes expresados de forma diferente (DEGs) en el estroma y en las glándulas tumorales ce pacientes respondedores y no-respondedores mostraron que la mayoría de los cambios esteban asociados al compartimento estromal. Los análisis de ontología génica revelaron que los DEGs codificaban mayoritariamente para la matriz extracelular y para componentes ribosomales.
Construimos un clasificador específico para CAF con genes que mostraban cambios monotónicos en su expresión, de acuerdo al grado de regresión tumoral (coeficiente >1; FN1, COL3Al, COL1A1, MMP2 y IGFBPS). Estos fueron los genes que mostraron a priori las mayores diferencias en expresión en el estroma entre no-respondedores y respondedores. Estudiamos la expresión de estos 5 genes a nivel proteico en tinciones inmuhistoquímicas de una cohorte de 38 pacientes. Con propósitos predictivos, utilizamos el modelo de validación cruzada dejando uno fuera o leave-one-out-cross¬validation(LOOCV) obteniendo un valor predictivo positivo (PPV) de 80%. La posterior optimización del clasificador con Random Forest identificó a FN 1 y COL3A1 como los mejores predictores. Construimos nuevamente el modelo de regresión LOOCV mejorando así el rendimiento de la clasificación y obteniendo un PPV de 89.5% y un valor predictivo negativo(NPV) de 73.7%. Utilizamos una cohorte independiente de 36
