Resumen de Caracterizacion epidemiologica y molecular de los genes de resistencia a los farmacos antituberculosos de mycobacterium tuberculosis en sevilla
En nuestro trabajo hemos estudiado los mecanismos de resistencia a los principales antimicrobianos frente a Mycobacterium tuberculosis, la rifampicina (RMP) y la isoniacida (INH) en 429 aislamientos clinicos de la Seccion de Micobacterias del Hospital Universitario Virgen Macarena de Sevilla, durante los años 1994,1995 y 1996. Para ello hemos utilizado cuatro metodos moleculares diferentes: 1) PCR-SSCP (Polimorfismo de la Conformacion de las Cadenas Sencillas de ADN). 2) el sistema comercial INNOLIPA Rif. TB para la resistencia a RMP. 3) Amplificacion con los cebadores B1/B2 y electroforesis del producto amplificado y digerido con la enzima Ncil, para la resistencia a INH. 4) Secuenciacion.
En la resistencia a RMP de las 22 cepas resistentes estudiadas, tras la evaluacion de los patrones de RFLP, consideramos solo 17 cepas encontrando alteraciones geneticas en el gen rpoB en el 90,9%. Identificamos cuatro mutaciones puntuales. Ser531 Leu (12 cepas), His 526 Asp(1 cepa), Asn 518 Ser(1 cepa) y Gln 513 Leu (1 cepa). Y una deleccion parcial del gen rpoB de nueve nucleotidos cuya secuencia es GCTGAGCCA, entre los codones 510 y 513. En la cepa restante no encontramos alteracion genetica en el fragmento estudiado por lo que suponemos presenta algun mecanismo alternativo de resitencia frente a este antimicrobiano. La mutacion puntual en el codon 518 y la deleccion no habian sido descritas antes de nuestro estudio.
En la resistencia a INH existe mayor numero de cepa, 29, las cuales tras los resultados de la tecnica de RFLP quedan reducidas a 26 cepas.
Sin embargo tan solo en un 57,7% de las cepas llegamos a identificar alguna alteracion genetica en alguno de los genes implicados, hasta hoy, en esta resistencia: katG, inhA y ahpC.
En el gen katG se identifican dos mutaciones puntuales: Ser315 Thr(n 9 cepas) e lle304 Val(1 cepa), y dos delecciones parciales, en una de las cepas es de dos nucleotidos localizados en las posiciones 872 y 873, y
