Análisis de las interacciones de la proteína CI del virus de la sharka con proteínas de la planta

• Autores: Ignacio Jiménez Torres
• Directores de la Tesis: Juan Antonio García Alvarez (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Politécnica de Madrid ( España ) en 2004
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Luis Fernando García Rodríguez (presid.), Javier Romero Cano (secret.), Emilio Rodríguez Cerezo (voc.), Francisco Tenllado Peralo (voc.), César Llave Correas (voc.)
• Materias:
  • Ciencias agrarias
    • Fitopatología
      • Susceptibilidad y resistencia vegetal
      • Virus
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Archivo Digital UPM
• Resumen

  • Los potyvirus son virus de RNA de polaridad positiva cuyo genoma codifica una poliproteína que se procesa autocatalíticamente para dar lugar a al menos nueve proteínas maduras. Una característica de las infecciones por potyvirus es la acumulación de inclusiones citoplásmicas en forma de ruedas de molino, también llamadas inclusiones cilíndricas. Estas inclusiones están formadas por la proteína CI. Esta proteína está implicada en la replicación y en el movimiento de célula a célula del virus. En estudios previos, se realizó un escrutinio mediante el método de los dos híbridos de una genoteca de cDNA de Nicotiana benthamiana utilizando la proteína CI del virus de la sharka (PPV) como cebo. Se identificaron dos proteínas (L1 y L2) que interaccionaban específicamente con la proteína CI de PPV. L1 es una proteína desconocida con un dominio de dedos de zinc de tipo HIT, y L2 es el precursor de la subunidad PSI-K del fotosistema I. Con objeto de caracterizar dichas interacciones, se ha empleado el sistema de los dos híbridos para analizar los dominios implicados y la especificidad. Se ha comprobado que es necesario un fragmento que comprende los 409 aminoácidos N-terminales de la proteína CI para que la interacción tenga lugar. Las interacciones también se han detectado con la proteína CI de otro potyvirus (TVMV) y las proteínas L1 y L2 de otra planta (Arabidopsis thaliana), sugiriendo que dichas interacciones son un evento general en las infecciones por potyvirus. Para determinar la importancia biológica de las interacciones se ha analizado la infección de PPV en plantas de N. benthamiana con la expresión de L1 y L2 reducida mediante el silenciamiento de su RNA. Cuando el gen de L1 es silenciado, la acumulación del virus es más baja que en plantas control, sugiriendo que la proteína L1 puede tener un papel positivo para la infección de PPV. Sin embargo, cuando el gen de L2 es el silenciado, se observó una mayor acumulación de PPV. Se utilizó también un mutante nulo de la proteína L2 (PSI-K) de A. thaliana asegurando así la ausencia total de la proteína. Los resultados fueron similares a los obtenidos mediante el silenciamiento, sugiriendo que esta proteína interfiere con la infección de PPV, posiblemente a través de su interacción con la proteína CI. Además se han identificado dos proteína más de N. benthamiana que interaccionan con la proteína CI, así como tres proteínas de Arabidopsis, pero la importancia de estas interacciones está aún por determinar.