Resumen de Estudio de las modificaciones post-traducionales de proteínas durante el proceso de envejecimiento
En el presente trabajo intentamos aportar nuevos datos sobre las modificaciones post-traducionales en las proteínas durante el envejecimiento, estudiando distintas deshidrogenasas (enzima málico (EM); Glucosa 6-Fosfato deshidrogenasa (G-6-FDH); 6-Fosfoglucónico deshidrogenasa (6-FGDH), todas ellas de hígado, y la Isocitrato deshidrogenasa (IDH) de corazón) en ratas jóvenes y viejas, ya que hemos observado que pierden actividad durante el envejecimiento.
Para ello hemos seguido el siguiente plan de trabajo:
- Determinación de la relación actividad/cantidad de las enzimas estudiadas, en jóvenes y viejos, mediante inmunoprecipitación.
- Purificación de estas enzimas, en jóvenes y viejos, mediante cromatografía de Inmunoafinidad.
- Caracterización de dichas enzimas purificadas.
* Determinación de los pesos moleculares.
* Estudios cinéticos.
* Determinación de pH.
- Estudio en dichas moléculas enzimáticas, mediante el empleo de distintos reactivos específicos de aminoácidos, de posibles modificaciones aminoacídicas ocurridas durante el envejecimiento.
* Estudio de los grupos –SH en las moléculas mediante el reactivo DTNB.
* Estudio de los restos de histidina en las moléculas enzimáticas con el DEPC.
* Estudio de los restos de arginina con p-NPG.
* Estudio de los restos de mitionina con Cloramina-T.
* Estudio de los restos lisina con TNES.
- Oxidación “in vitro” de la EM y 6-FGDH de joven con ascorbato.
CONCLUSIONES:
1. La pérdida de actividad, producida durante el envejecimiento de la IDH-NADP+ de corazón de rata, parece ser debida a una disminución de la cantidad de proteína enzimática.
2. La pérdida de actividad, producida durante el envejecimiento, de la enzima G-6-FDH de hígado de rata no es debida a la disminución de la cantidad de proteína enzimática, así como, tampoco, a la modificación química producida en los aminoácidos estudiados.
3. La pérdida de actividad, producida durante el envejecimiento, en la EM de hígado de rata parece ser debida a disminución de su actividad por cambio en un resto de histidina de la proteína enzimática.
4. Los grupos –SH y los restos de histidina y arginina parecen estar implicados en la actividad catalítica de la EM de hígado de rata.
5. La pérdida de actividad, producida durante el envejecimiento, en la enzima 6-FGDH de hígado de rata parece ser debida a disminución de su actividad por cambios en los restos de lisina de la proteína enzimática (se valoran 39,0 ± 2,8 en la proteína de joven frente a 28,1 ± 4,7 en la proteína de viejo).
6. Los grupos –SH y los restos de histidina, arginina y lisina parecen estar implicados en la actividad catalítica de la enzima 6-FGDH de hígado de rata.
7. Los cambios producidos tanto en el resto de histidina de la EM, como en los restos de lisina de la 6-FGDH, producidos durante el envejecimiento, y, responsables de la pérdida de actividad enzimática de las mismas, podrían ser debidas a una oxidación en dichos restos aminoacídicos.
