Estudios analiticos, estructurales y dinamicos de los complejos histona-dna (aplicacion de metodos electroforeticos)

• Autores: Anna Aragay Combas
• Lectura: En la Universitat Autònoma de Barcelona ( España ) en 1990
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Juan Antonio Subirana Torrent (presid.), Ferran Azorín Marín (secret.), Jaume Palau Albet (voc.), Luis Cornudella Mir (voc.), Pere Suau León (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
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• Resumen

  • Los resultados obtenidos en esta tesis han permitido, en primer lugar, desarrollar una tecnica de tincion fluorescente mediante el colorante no covalente ans para la deteccion de histonas y otras proteinas separadas en geles de electroforesis en presencia de agentes desnaturalizantes. Esta tecnica ha aportado las ventajas de ser un metodo rapido, cuantitativo, de gran sensibilidad y que no necesita de la fijacion de la proteina en el gel. Tambien se ha desarrollado la tecnica de analisis de particulas nucleo y de los complejos proteina-dna mediante electroforesis no desnaturalizante. Este metodo ha permitido el estudio de la estabilidad, tanto estructural como estequiometrica, de las particular nucleo y de los complejos formados entre las histonas h2ah2b y dna y las h3h4 con el dna. Se ha demostrado mediante electroforesis de baja fuerza ionica, desnaturalizacion termica y sedimentacion, que las histonas h2ah2b solas pueden formar complejos estables con el dna nucleosomal, que resultan de la adicion sucesiva de dimeros h2ah2b al dna. A partir de estos estudios ha sido posible demostrar que las particulas nucleo a fuerza ionica fisiologica pueden unir diferentes oligomeros de histomas y que a su vez estas pueden ser transferidas a dna libre para formar o bien nuevas particulas nucleo o los complejos proteina-dna mencionados. Se han mostrado diferentes mecanismos de autoasociacion de particulas nucleo por transferencia de histonas. Se ha podido concluir que no existe una sola via para la formacion del nucleosoma. Es de suponer que dado que los complejos intermedios estudiados en este trabajo tienen una vida media y estabilidad suficientemente grandes podrian intervenir en algunos procesos bilogicos en el nucleo celular.