Resumen de Estudis sobre el mecanisme de formacio del nucleosoma
Pocos segundos despues del inicio de la reaccion de reasociacion, la mayor parte del dna de la particula nucleo resulta protegido frente a la digestion con nucleasa micrococcal. Las regiones centrales y c-terminales de las histonas internas resultan tambien protegidas frente a la digestion con tripsina ya inmediatamente despues del salto salino. Con dnasai se observan pequeñas diferencias estructurales entre muestras digeridas a tiempos diferentes durante la reaccion de reasociacion. Sin embargo, incluso en este caso, la mayoria de las interacciones especificas entre el dna y las histonas en el interior de la particula nucleo se establecen pocos segundos despues del inicio de la reaccion. Una digestion exhaustiva con dnasa i o con tripsina de particulas nucleo marcadas con npm no origina cambios significativos en la emision de fluorescencia a 460 nm. Ello indica que la continuidad covalente del dna no es necesaria para el mantenimiento de la conformacion plegada de la particula nucleo y que los dominios de las histonas resistentes a la degradacion con tripsina juegan un papel fundamental en la estabilizacion del nucleosoma. Las regiones n-terminales de las histonas podrian estar basicamente implicadas en la formacion de estructuras de orden superior. En geles de nucleoproteina en tbe, los complejos dna-(h3, h4) originan dos bandas bien definidas mientras que los complejos dna-(h2a, h2b) producen una banda ancha y poco definida, que sugiere que su tiempo de vida es menor. En ambos casos sin embargo, la mayor parte del dna se encuentra asociado a las histonas, incluso en disolucion. Por interaccion de los complejos dna-(h3, h4) y dna-(h2a, h2b), respectivamente, con los pares de histonas h2a, h2b y h3,h4, se obtienen unas estructuras nucleosomales que contienen las cuatro histonas internas. Nuestros resultados indican que se produce una transferencia de pares de histonas entre los complejos dna-(h2a, h2b) y dna-(h3, h4)
