Resumen de Expanding knowledge on mycoplasma hyopneumoniae gilt acclimation, vaccination and genetic variability
Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae) sigue siendo un patógeno respiratorio causante de importantes pérdidas económicas en la industria porcina de todo el mundo, principalmente durante los períodos de crecimiento y cebo. La gravedad de estos problemas respiratorios se ha asociado con la prevalencia de M. hyopneumoniae al destete. Hoy en día, las primíparas se consideran la principal fuente de infección por M. hyopneumoniae para sus lechones. Por tanto, se considera que el control de M. hyopneumoniae mediante una adecuada adaptación de la reposición frente a esta bacteria es clave. De este modo, el objetivo de esta Tesis fue ampliar el conocimiento sobre las estrategias de adaptación de la reposición utilizadas en Europa en la actualidad, así como evaluar el efecto de la estrategia más común (la vacunación) en la reposición y sus lechones al destete. Además, la presencia de diferentes cepas de M. hyopneumoniae también se ha relacionado con problemas respiratorios más graves en cerdos de engorde. Por tanto, también se investigó la variabilidad genética de M. hyopneumoniae en cerdos no vacunados y vacunados que presentaban lesiones pulmonares asociadas a M. hyopneumoniae en matadero, así como en las vacunas usadas en cada granja.
El objetivo del primer estudio consistió en identificar las estrategias actuales de adaptación de la reposición frente M. hyopneumoniae utilizadas en las granjas porcinas de Europa. Para alcanzar dicho objetivo, se diseñó un cuestionario centrado en las diferentes características de la explotación, la reposición y el proceso de adaptación. Esta encuesta fue distribuida entre veterinarios porcinos europeos, colectándose finalmente información sobre 321 granjas. Los resultados de esta encuesta indicaron que M. hyopneumoniae sigue siendo una preocupación para la industria porcina europea representada en esta encuesta. Curiosamente, la mayoría de los encuestados introducían reposición seropositiva en las explotaciones, aunque la mayoría de ellos desconocía el estado de infección de la misma. No obstante, la mayoría de los encuestados respondió que realizaba la adaptación de la reposición frente a M. hyopneumoniae. En particular, los resultados obtenidos indicaron que la vacunación frente M. hyopneumoniae con múltiples dosis, fue la estrategia más utilizada, sola o en combinación con otros métodos, para la adaptación de la reposición frente a este patógeno en Europa. Solo una minoría de los participantes verificó el efecto del proceso de adaptación utilizado.
Con el fin de conocer el efecto de la vacunación de la reposición frente a M. hyopneumoniae en la adaptación, se evaluaron diferentes programas vacunales en el segundo estudio de esta Tesis. Para ello, se seleccionaron 180 cerdas negativas frente a M. hyopneumoniae en la unidad de adaptación de una granja positiva a M. hyopneumoniae. Las nulíparas se distribuyeron según el programa vacunal en tres grupos: (A) cuatro dosis de una vacuna comercial contra M. hyopneumoniae a las 2, 4, 6 y 8 semanas tras la entrada (spe) en la unidad de adaptación, (B) dos dosis de vacuna a las 2 y 6, y dos inyecciones de solución salina tamponada con fosfato (PBS) a las 4 y 8 spe, y (C) cuatro dosis de PBS a los mismos tiempos. Se tomaron hisopos laríngeos para evaluar la excreción de M. hyopneumoniae y su variabilidad genética, y muestras de sangre para la evaluación de la inmunidad humoral de las nulíparas a las spe 1 (entrada), 14 (después de la adaptación), 27 (confirmación de gestación) y 34 (semana previa al parto). Además, se tomaron hisopos laríngeos y sangre de seis de sus lechones al destete. Los grupos vacunados (A y B) mostraron una proporción significativamente más baja de nulíparas excretoras en comparación con el grupo no vacunado después de la adaptación (de las spe 14 a 34). Además, se detectó una menor variabilidad genética de M. hyopneumoniae en el lote de nulíparas monitorizadas en comparación con dos lotes estudiados previamente. Los niveles de anticuerpos fueron significativamente más altos (medido a través de porcentaje de inhibición [PI] de un ELISA competitivo) en nulíparas vacunadas que en las no vacunadas durante todo el estudio. Sin embargo, no se encontraron diferencias significativas entre los protocolos de vacunación con cuatro o dos dosis en términos de valores de ELISA (PI). Respecto a los lechones al destete, todos fueron negativos a M. hyopneumoniae por PCR en tiempo real, independientemente del programa de vacunación administrado a sus madres. Por otro lado, la proporción de lechones seropositivos y los niveles de anticuerpos fueron mayores en los lechones provenientes de los grupos vacunados. Este estudio demostró por primera vez que la vacunación de la reposición frente a M. hyopneumoniae puede ser una herramienta eficaz para reducir la presión de infección y la variabilidad de M. hyopneumoniae en lotes de reposición, así como proporcionar una inmunidad humoral a largo plazo para la reposición y sus lechones.
El tercer estudio de esta Tesis tuvo como objetivo evaluar la variabilidad genética de M. hyopneumoniae en cerdos no vacunados y vacunados que presentaban lesiones pulmonares asociadas a M. hyopneumoniae en los mataderos. Asimismo, se evaluó la variabilidad genética de las vacunas comerciales frente a M. hyopneumoniae utilizadas en las granjas vacunadas. Para lograr este objetivo, se seleccionaron diez granjas de cerdos de engorde vacunadas y diez no vacunadas, todas ellas con problemas respiratorios clínicos asociados a M. hyopneumoniae. Una vez en el matadero, se evaluaron las lesiones pulmonares compatibles con M. hyopneumoniae de un lote por granja y se recogieron muestras de los tres pulmones con la lesión más extensa. Los pulmones positivos a M. hyopneumoniae por PCR se genotiparon mediante secuenciación contando el número variable de repeticiones en tándem (del inglés, variable number of tandem repeats, VNTR) en dos (P97, P146) o cuatro genes (P97, P146, H1 y H5). Posteriormente se asignó un perfil de tipificación (TP) de M. hyopneumoniae a la combinación única de VNTR de estos dos o cuatro genes. Se detectaron varios TPs en las granjas no vacunadas y vacunadas, tanto cuando se utilizaron cuatro o dos genes. Cuanto mayor fue el número de genes estudiados, mayor variabilidad. A pesar de esto, solo se detectó un TP por pulmón y los TPs detectados en cerdos de granjas vacunadas fueron diferentes de la cepa vacunal utilizada en la granja. Este estudio describe por primera vez la variabilidad genética de M. hyopneumoniae dentro y entre- granjas de engorde no vacunadas y vacunadas en España. Además, los resultados confirmarían que la cepa presente en las granjas vacunas es diferente a la de la vacuna comercial utilizada. Además, este estudio proporciona datos novedosos e interesantes sobre el efecto del número de genes analizados sobre la variabilidad genética de M. hyopneumoniae, dando pie a futuras discusiones.
En resumen, a partir de los estudios incluidos en esta Tesis, se puede concluir que la adaptación de la reposición frente a M. hyopneumoniae es una estrategia comúnmente realizada en Europa, y que la vacunación es el método más utilizado para dicha adaptación. De hecho, los resultados de esta Tesis mostraron que la vacunación de la reposición frente a M. hyopneumoniae puede ser una herramienta eficaz para reducir la excreción bacteriana y proporcionar inmunidad humoral a las nulíparas y los lechones. Por último, la variabilidad genética de M. hyopneumoniae se detectó en lotes de reposición, así como en cerdos sacrificados con lesiones asociadas a M. hyopneumoniae provenientes de granjas de engorde con diferentes estados de vacunación.
