Resumen de Small rnas and plant defense: From functional characterization to tool development
Las plantas codifican para una batería de receptores intracelulares conocidos como genes de Resistencia o NLRs (nucleotide-binding leucine-rich repeat receptors), que reconocen a proteínas efectoras y disparan una respuesta de defensa de tipo ETI (Effector-Triggered Immunity). En plantas, estos genes se clasifican en dos sub-familias: CNLs (Coiled-Coil) o TNLs (Toll-interleukin-1). Esta tesis doctoral, ha demostrado que el miR825-5p de Arabidopsis thaliana regula la expresión del gen TNL, AT5G38850 (MIST1). El reconocimiento ocurre mediante una secuencia presente en MIST1 que codifica para el motivo TIR-2, ligado al correcto funcionamiento de estos receptores. Además, este miRNA dispara la producción de siRNAs secundarios (phasiRNAs) a partir de MIST1, estableciendo una compleja red de regulación de genes de resistencia con una implicación en la respuesta inmune frente a Pseudomonas syringae. Durante la respuesta de defensa, tanto el miR825-5p como los phasiRNAs reducen su acumulación, permitiendo la expresión de los genes TNLs.
Gracias a el uso de fusiones transcripcionales al gen chivato GUS se han caracterizado los patrones de expresión de ambos genes (Pri-miR825 y MIST1) así como el dominio de actividad del miR825-5p. Esta caracterización sugiere una mayor actividad del miRNA y una mayor producción de phasiRNAs en las hojas adultas de Arabidopsis thaliana. Además, se observo una reducción de los niveles del miRNA maduro y phasiRNAs y el incremento de los niveles de su diana MIST1, durante el desarrollo. Estos resultados están en concordancia con observaciones previas que describen un aumento de la resistencia frente a P. syringae durante el envejecimiento de las hojas de A. thaliana.
Finalmente se ha generado una nueva metodología para la producción sencilla y económica de Target Mimics (MIMs), una herramienta ampliamente utilizada para la caracterización funcional de los pequeños RNAs en planta. Esta nueva metodología permite su aplicación directa en estudios de escala masiva.
