Resumen de Regulación epigenética, asociada a hipoxia, de odz1, un nuevo marcador de invasión en glioblastoma
Carlos José Velásquez Rodríguez
ODZ1 se ha asociado con la invasión celular en el glioblastoma a través de la regulación positiva de la señalización RhoA / ROCK y, en general, su mayor expresión conlleva un peor pronóstico. Sin embargo, aún se desconocen el valor de ODZ1 en la práctica clínica y los mecanismos que activan la vía de ODZ1. El objetivo del presente trabajo era evaluar la asociación entre la expresión de ODZ1 y las características radiológicas del tumor relevantes clínicamente. Además, planteamos la hipótesis de que la hipoxia, una característica biológica distintiva del glioblastoma, desempeña un papel significativo en la regulación de la invasión tumoral dependiente de ODZ1.
Se evaluaron las características tumorales radiológicas pre y posoperatorias y la expresión tumoral de ODZ1 en pacientes con glioblastoma. Específicamente, se evaluó la asociación entre el patrón de recurrencia tumoral y la expresión de ODZ1. Además, de forma similar, se identificaron las características radiológicas preoperatorias del tumor asociadas con ODZ1. Aunque la mayoría de los tumores con recurrencias distantes (> 2 cm del tumor primario) tenían una mayor expresión de ODZ1 en comparación con las recurrencias focales, esta diferencia no alcanzó significación estadística. Además, entre las características geométricas del tumor, el ancho del anillo tumoral captante de contraste se asoció significativamente con la expresión de ODZ1.
Por otro lado, se utilizó pimonidazol (PIMO) para identificar las células tumorales hipóxicas en muestras de 17 glioblastomas IDHwt. El Illumina Infinium HumanMethylationEPIC Array se usó para determinar el estado de metilación del promotor de ODZ1 en células PIMO-positivas y PIMO-negativas clasificadas por FACS. Además, la expresión de ODZ1 en regiones hipóxicas y normóxicas fue evaluada por IHQ. In vitro, las células de glioblastoma se transfectaron con el promotor ODZ1 clonado o metilado en el vector pGL2-luciferasa para comparar el promotor de tipo salvaje frente a promotor mutante y el metilado frente a no metilado, y luego se cultivaron en condiciones hipóxicas o normóxicas. La expresión de ARNm de ODZ1 y la migración celular se determinaron con RT-PCR y un ensayo de cámara de Boyden modificado, respectivamente.
Las regiones tumorales hipóxicas expresaron niveles más altos de ODZ1, y la hipoxia induce la expresión de ODZ1 en células de glioblastoma regulando el estado de metilación del promotor ODZ1. La regulación positiva inducida por la hipoxia de ODZ1 se correlaciona con una mayor capacidad de migración, que se reduce drásticamente al bloquear ODZ1. Un sitio CpG funcionalmente activo se encuentra en el extremo 3 ́ del promotor, que está hipermetilado en las células neuronales somáticas y principalmente hipometilado en las células glioblastoma. La metilación in vitro del promotor o la mutagénesis de este sitio CpG reduce la actividad del promotor en respuesta a la hipoxia. Los resultados presentados aquí sugieren que el ancho del anillo tumoral captante de contraste, que se ha asociado con un mal resultado, podría estar relacionado con la invasión dependiente de ODZ1. Además, aquí identificamos la hipoxia como el primer activador extracelular de la expresión de ODZ1 y describimos que la hipoxia controla los niveles de este inductor de migración, al menos en parte, regulando el estado de metilación del promotor ODZ1.
