Desarrollo de cuatro sistemas de PCR cuantitativa en tiempo real para la cuantificación y caracterización de ADN de trigo, de cebada y de centeno en alimentos "sin gluten" para celiacos. Nuevas técnicas en la analítica del gluten

• Autores: Jorge Raúl Mujico Fernández
• Directores de la Tesis: Enrique Méndez Cormán (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2007
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Guillermo Reglero Rada (presid.), Francisco Javier Señorans Rodríguez (secret.), Alejandro Cifuentes Gallego (voc.), Enriqueta Román Riechmann (voc.), Carmen Ribes Koninckx (voc.)
• Materias:
  • Ciencias tecnológicas
    • Tecnología de los alimentos
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
• Resumen

  • La Enfermedad Celiaca (EC) es una intolerancia al gluten de carácter permanente, cuyo único tratamiento es una dieta de por vida con alimentos que no contengan gluten de trigo, de cebada y de centeno. Convencionalmente, para detectar el gluten en los alimentos para celiacos se han venido utilizado métodos inmunológicos (tipo ELISA o Western Blot) y, ocasionalmente, no-inmunológicos (como la Espectrometría de Masas MALDI-TOF).

    En esta Tesis Doctoral se han desarrollado por primera vez cuatro sistemas no-inmunológicos de detección y cuantificación (individual o simultánea) de ADN de trigo, cebada y centeno en alimentos "sin-gluten", basados en la PCR Cuantitativa en Tiempo-Real (Q-PCR) y el SYBR Green I. Las sensibilidades de detección de ADN de estos sistemas son similares a la del método de ELISA-R5. Los cuatro sistemas de Q-PCR utilizan un nuevo protocolo para la extracción de ADN en alimentos, basado en el método Wizard, pero más rápido, con un mayor rendimiento y de una pureza suficiente que evitar un paso posterior de purificación.

    A diferencia de los métodos de detección de gluten ya existentes, los tres sistemas individuales de Q-PCR permiten por primera vez diferenciar directamente si el tipo de contaminación es de trigo, de cebada o de centeno. El sistema simultáneo de Q-PCR, en función de la Temperatura de Melting, solo discrimina si las contaminaciones son bien de trigo/cebada o de centeno. Una de las ventajas del sistema simultáneo de Q-PCR es que el valor de ADN que se obtiene es prácticamente idéntico a la suma de los valores de ADN cuantificados con los sistemas individuales. Esto representa una gran ventaja para el sistema simultáneo, ya que en alimentos contaminados con mezclas de estos tres cereales, con un único análisis, se evita la necesidad de realizar los tres sistemas individuales. Otra ventaja es que en los alimentos no tratados con calor existe una gran linearidad entre los niveles de ADN (cuantificados con el