Resumen de Caracterización "in vitro" e "in vivo" de los vectores atenuados de poxvirus MVA y NYVAC como candidatos vacunales frente al VIH-SIDA
José Luis Nájera García
El sistema 2-5A/RNasa L está formado por las enzimas 2¿5¿oligoadenilato sintetasa (2¿-5¿OAS) y RNasa L implicadas en llevar a cabo las acciones antivirales del interferón. La enzima 2¿-5¿OAS se activa tras las infecciones virales por el RNA bicatenario (dsRNA) y produce los 2¿5¿ oligoadenilatos, (p3(A2¿p5¿)2A, que se unen a RNasa L activándola. RNasa L es la enzima efectora que desempeña la acción nucleasa del sistema 2-5A degradando tanto RNAs ribosomales como virales y celulares, lo que resulta en una inhibición de la síntesis de proteínas y en apoptosis. La activación de RNasa L también induce apoptosis. Para obtenter mas información sobre el mecanismo molecular por el cual RNasa L induce apoptosis, hemos expresado las enzimas RNasaL y 2¿-5¿OAS en células humanas HeLa usando vectores vaccinia recombinantes y hemos analizado en detalle distintos marcadores bioquímicos de apoptosis y su relación con la degradación del rRNA. Se han realizado experimentos de microarrays tras la activación del sistema 2-5A/RNasa L, para analizar la expresión de genes celulares específicos. Nuestros resultados muestran evidencia de la implicación de distintas caspasas (2,8 y 9) en la apoptosis inducida por el sistema 2-5A/RNasa L, en concreto, hemos definido su papel en la ruta intrínsica o mitocondrial. El Sistema 2-5A/RNasa L induce la salida del citocromo c de la mitocondria al citosol de una manera dependiente de la activación de las caspasas. El desarrollo de apoptosis produce la ruptura del potencial mitocondrial y la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS), ambos procesos son dependientes de caspasas. La activación de RNasa L induce alteraciones morfológicas en la mitocondria, y proteinas mitocondriales implicadas en apoptosis juegan un papel en este proceso. La proteína antiapoptótica Bcl2 es capaz de bloquear la apoptosis inducida por el sistema 2-5A/RNasa L e impide tambien la disminución del potencial mitocondrial. Ambas enzimas RNasa L y 2¿-5¿OAS se localizan principalmente en las fracciones mitocondriales durante el desarrollo de apoptosis. Los resultados presentados en esta tesis doctoral demuestran que la activación de la enzima RNasa L produce la degradación del rRNA, lo cual es previo y necesario para la inducción de apoptosis. Además, la activación de RNasa L produce la degradación del rRNA mitocondrial 16S, lo cual confirma la localización del sistema 2-5A/RNasa L en este orgánulo y nos muestra una nueva función de RNasa L en el metabolismo del RNA mitocondrial. Los análisis de microarrays han indentificado una serie de genes cuya expresión está significactivamente aumentada o disminuida por acción de la expresión del sistema 2-5A/RNasa L. Resumiendo, nuestros datos demuestran el significado biológico del sistema 2-5A/RNasa L en la inducción de apoptosis a través de la ruta mitocondrial y definen los mecanismos moleculares implicados.
