Caracterización del mecanismo de empaquetamiento in vitro de DNA del fago [phi]29

• Autores: Borja Ibarra Urruela
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2001
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Miguel Hermoso Jose (presid.), Jose Berenguer (secret.), Juan Ortin (voc.), Luis Nieva Jose (voc.), Carlos Alonso Juan (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Química orgánica
      • Estructura de moléculas orgánicas
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
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• Resumen

  • Los bacteriofagos son virus que infectan bacterias. Estos fagos suponen muy buenos modelos para el estudios de una serie de procesos biologicos generales. En este trabajo se ha utilizado al bacteriofago o29 como modelo para el estudio del proceso de empaquetamiento del DNA hasta densidades cuasi-cristalinas en el interior de la capsida viral.

    Se ha puesto han punto y se ha caracterizado un sistema de empaquetamiento in vitro del DNA de o29. Para su desarrollo fue necesario primero obtener todos sus componentes de forma soluble y funcional. Estos incluyen las precabezas del virus con un pequeño RNA(pRNA), el DNA a empaquetar y la proteina gp16 del fago. Esta ultima proteina es muy hidrófoba y agrega cuando es sobre-expresad en E.coli, por lo que para su solubilizacion fue necesario sobreexpresarla junto con las chaperonas procarioticas GroEL y GroES. La sobre-expresion de estas chaperonas junto con la proteina gp16 permitio la solubilizacion de esta ultima y por tanto su posterior purificacion.

    La proteina gp16 es la encargada de suministrar la energia necesaria para el proceso de empaquetamiento del DNA mediante la hidrólisis del ATP. Por este motivo se cuantifico la actividad ATPasa de la proteina y se analizo el estimulo inducido por los diferentes componentes del sistema sobre la hidrólisis de ATP por esta proteina. Los resultados de estos experimentos revelaron que la proteina gp16 presenta una actividad ATPasa dependiente de acidos nucleicos.

    Posteriormente se comprobó que la ATPasa gp16 interacciona con las precabezas del fago(las estructuras donde el DNA esta empaquetado). Esta interacción se produce a nivel de una proteina oligomerica denominada conector que es la puerta de entrada del DNA a esta.

    La ATPasa gp16 interacciona con un pequeño RNA codificado por el fago y denominado pRNA, este es esencial para el empaquetamiento y se situa en la zona del conectar de la precabeza donde tambien interacciona la proteina gp