Clonaje molecular y caracterización de proteínas del parásito 'Anasakis simplex' negativas con IgE
- Autores: Ignacio María Arrieta Algarra
- Directores de la Tesis: Carlos Lahoz Navarro (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2000
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Alberto Durantez Martin (presid.), Jesús González Cabreo (secret.), José Ignacio Moneo Goiri (voc.), Pilar Palomino Díaz (voc.), Alfredo Bootello Gil (voc.)
- Materias:
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- Resumen
El objetivo principal de este trabajo es el clonaje molecular y caracterización de proteínas de A. Simplex que tengan reactividad con la IgE humana.
Mediante la construcción de una genoteca génica de A.Simplex identificar los genes que codifican proteínas reactivas con la IgE humana, para posteriormente realizar una clonación y secuenciación de los mismos. Expresar las proteínas que codifican dichos genes y estudiar su reactividad con IgE humana, así como realizar un análisis comparativo de dichas proteínas de A. Simplex con otras descritas en otros parásitos. Estudio de la actividad biológica de un extracto proteico de A. Simplex. Para ello se harán experimentos de quimiotaxis en un modelo animal de ratón e inducción de un modelo de inflamación bronquial también en un modelo animal de ratón.
La metodología usada ha sido fundamentalmente el clonaje en vectores plasmídicos y expresión de proteínas en el sistema de reticulocitos de conejo y en bacterias E.coli mediante subclonaje en vectores de expresión como el PGEX-5X1. Otras técnicas utilizadas han sido Western-Blot para análisis de inmunoreactividad IgE de dichas proteínas clonadas. Para el tercer objetivo se ha utilizado técnicas anatomo patológicas para estudio de la quimiotaxis in vivo, así como técnicas citométricas.
Tras la fase experimental y el análisis de los resultados se ha llegado a estas conclusiones:
1,- Se ha construido una genoteca génica de A.Simplex, de la cual se han seleccionado y clonado seis genes hasta ahora no descritos en esta especie de nemátodo. Se han comparado las secuencias deducidas de aminoácidos con otras previamente descritas, comprobándose en cuatro de las seis proteínas una homología importante con las equivalentes de otras especies.
2,- Uno de los seis genes (clon 6) codifica una proteína, la cual ha demostrado tener capacidad de reaccionar con la IgE humana. Siendo la primera proteína clonada de A.sim
