Potencial uso de la tecnología basada en microarns para el diagnóstico y pronóstico de la escoliosis idiopática del adolescente

• Autores: Ester Berenguer Pascual
• Directores de la Tesis: Jose Luis Garcia Gimenez (dir. tes.), Gisselle Pérez Machado (codir. tes.), Salvador Mena Mollá (codir. tes.)
• Lectura: En la Universitat de València ( España ) en 2022
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Agustín Lahoz Rodríguez (presid.), Gloria Olaso González (secret.), Carmen Aguado Muñoz (voc.)
• Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Biomedicina y Biotecnología por la Universitat de València (Estudi General)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: TESEO
• Resumen

  • Introducción: La escoliosis idiopática del adolescente (EIA) es una deformidad tridimensional de la columna vertebral cuya etiología es aún desconocida. Actualmente no existe una explicación clara sobre la evolución de la enfermedad; El diagnóstico y seguimiento actual de la EIA se basa en el análisis de la curvatura de la columna mediante radiografía de rayos X, la cual está considerada como la técnica gold standard. Sin embargo, esta técnica no tiene valor pronóstico y las repetidas exposiciones han demostrado incrementar la incidencia de cáncer. Es necesario, por tanto, el desarrollo de una nueva herramienta para el diagnóstico temprano y monitorización de la progresión de la EIA. El papel de los factores genéticos implicados en la EIA está bien documentado, pero más recientemente, se ha hecho hincapié en el papel de la epigenética, la cual también puede contribuir a la etiopatogenia de la EIA. En este contexto, los miARNs, moléculas de señalización epigenética que contribuyen a la morfogénesis ósea y a la osteoclastogénesis, pueden convertirse en nuevos y útiles biomarcadores para el diagnóstico/pronóstico de esta enfermedad. Objetivos: Optimizar la RT-qPCR con el diseño de cebadores y sonda para cada uno de los miARNs y con ellos desarrollar de un test In vitro (IVD), ScoliPro®, basado en la detección de una firma de miARNs (hsa-miR-27a, hsa-miR-122-5p, hsa-miR-223-5p y hsa-miR-1306-3p) como biomarcadores de diagnóstico/pronóstico de EIA. Materiales y Métodos: Para desarrollar el prototipo del test, se diseñan cebadores específicos y sondas Taqman para la medición de la firma de miARNs mediante RT-qPCR en la plataforma LightCycler480II (Roche). Se evalúa la sensibilidad y especificidad analítica utilizando miARNs sintéticos. La capacidad diagnóstica/ pronóstica del prototipo del test se evalúa en muestras de plasma de 52 pacientes con EIA (cohorte de validación del kit) reclutados en el Hospital La Fe (Valencia) y el Hospital Doctor Peset (Valencia). Las variables antropométricas y los niveles de expresión de los miARNs se utilizan para evaluar la capacidad diagnóstica/pronóstica de ScoliPro®. Resultados: se optimiza la RT-qPCR. La expresión de los miARNs miR-122-5p y miR-1306-3p de los pacientes con EIA muestran patrones de expresión diferencial estadísticamente significativos en comparación con los controles. Se observan diferencias significativas de expresión en el miR-1306-3p cuando se compara el grupo de pacientes EIA que evolucionan a escoliosis más severas con el grupo que no progresa, función pronóstica del test. Conclusiones: La implicación de miR-122-5p y miR-1306-3p en la EIA proporciona una nueva herramienta para el diagnóstico temprano, pronóstico y la variabilidad fenotípica de la EIA lo cual se puede evaluar a través del kit ScoliPro®.