Durante la última década, gracias a los avances en las tecnologías de secuenciación masiva que han permitido un análisis más profundo de los transcriptomas de varios organismos modelo, se ha determinado que los genomas se transcriben de manera generalizada. Este fenómeno da lugar a una gran cantidad de transcritos de RNA no canónicos y en su mayoría antisentido que se producen por la RNA polimerasa II a partir de casi cualquier contexto genómico. Estas especies de RNA son degradadas por mecanismos de vigilancia que actúan principalmente a nivel nuclear. Sin embargo, la información acerca de las proteínas que controlan el destino de estos transcritos no productivos es muy escasa. Trypanosoma brucei es un parásito extracelular que pertenece a la clase Kinetoplastea y es el agente causante de la tripanosomiasis humana africana (HAT), también conocida como la enfermedad del sueño. Los tripanosomas son eucariotas unicelulares cuya transcripción por parte de la RNA polimerasa II es constitutiva y tanto el inicio como la terminación de la transcripción ocurren en un número limitado de sitios por cromosoma. En la actualidad se desconoce si existe una transcripción generalizada en organismos donde la regulación transcripcional está prácticamente ausente o qué factores podrían estar implicados en este proceso. Trabajos publicados previamente por nuestro grupo indican que la proteína de unión a RNA RBP33 se une a transcritos procedentes de zonas que normalmente se encuentran silenciadas, lo que sugiere que existe un vínculo entre RBP33 y la terminación de la transcripción en T. brucei. Por este motivo, durante esta tesis doctoral se han estudiado distintos aspectos de la regulación de la expresión génica para determinar el papel que la proteína de unión a RNA RBP33 tiene en la regulación de la abundancia de estos RNAs no canónicos en T. brucei. El análisis detallado del transcriptoma de los tripanosomas muestra que el silenciamiento de RBP33 por ribointerferencia provoca una sobreexpresión de aproximadamente el 40% de todos los genes anotados Durante la última década, gracias a los avances en las tecnologías de secuenciación masiva que han permitido un análisis más profundo de los transcriptomas de varios organismos modelo, se ha determinado que los genomas se transcriben de manera generalizada. Este fenómeno da lugar a una gran cantidad de transcritos de RNA no canónicos y en su mayoría antisentido que se producen por la RNA polimerasa II a partir de casi cualquier contexto genómico. Estas especies de RNA son degradadas por mecanismos de vigilancia que actúan principalmente a nivel nuclear. Sin embargo, la información acerca de las proteínas que controlan el destino de estos transcritos no productivos es muy escasa. Trypanosoma brucei es un parásito extracelular que pertenece a la clase Kinetoplastea y es el agente causante de la tripanosomiasis humana africana (HAT), también conocida como la enfermedad del sueño. Los tripanosomas son eucariotas unicelulares cuya transcripción por parte de la RNA polimerasa II es constitutiva y tanto el inicio como la terminación de la transcripción ocurren en un número limitado de sitios por cromosoma. En la actualidad se desconoce si existe una transcripción generalizada en organismos donde la regulación transcripcional está prácticamente ausente o qué factores podrían estar implicados en este proceso. Trabajos publicados previamente por nuestro grupo indican que la proteína de unión a RNA RBP33 se une a transcritos procedentes de zonas que normalmente se encuentran silenciadas, lo que sugiere que existe un vínculo entre RBP33 y la terminación de la transcripción en T. brucei. Por este motivo, durante esta tesis doctoral se han estudiado distintos aspectos de la regulación de la expresión génica para determinar el papel que la proteína de unión a RNA RBP33 tiene en la regulación de la abundancia de estos RNAs no canónicos en T. brucei. El análisis detallado del transcriptoma de los tripanosomas muestra que el silenciamiento de RBP33 por ribointerferencia provoca una sobreexpresión de aproximadamente el 40% de todos los genes anotados Durante la última década, gracias a los avances en las tecnologías de secuenciación masiva que han permitido un análisis más profundo de los transcriptomas de varios organismos modelo, se ha determinado que los genomas se transcriben de manera generalizada. Este fenómeno da lugar a una gran cantidad de transcritos de RNA no canónicos y en su mayoría antisentido que se producen por la RNA polimerasa II a partir de casi cualquier contexto genómico. Estas especies de RNA son degradadas por mecanismos de vigilancia que actúan principalmente a nivel nuclear. Sin embargo, la información acerca de las proteínas que controlan el destino de estos transcritos no productivos es muy escasa. Trypanosoma brucei es un parásito extracelular que pertenece a la clase Kinetoplastea y es el agente causante de la tripanosomiasis humana africana (HAT), también conocida como la enfermedad del sueño. Los tripanosomas son eucariotas unicelulares cuya transcripción por parte de la RNA polimerasa II es constitutiva y tanto el inicio como la terminación de la transcripción ocurren en un número limitado de sitios por cromosoma. En la actualidad se desconoce si existe una transcripción generalizada en organismos donde la regulación transcripcional está prácticamente ausente o qué factores podrían estar implicados en este proceso. Trabajos publicados previamente por nuestro grupo indican que la proteína de unión a RNA RBP33 se une a transcritos procedentes de zonas que normalmente se encuentran silenciadas, lo que sugiere que existe un vínculo entre RBP33 y la terminación de la transcripción en T. brucei. Por este motivo, durante esta tesis doctoral se han estudiado distintos aspectos de la regulación de la expresión génica para determinar el papel que la proteína de unión a RNA RBP33 tiene en la regulación de la abundancia de estos RNAs no canónicos en T. brucei. El análisis detallado del transcriptoma de los tripanosomas muestra que el silenciamiento de RBP33 por ribointerferencia provoca una sobreexpresión de aproximadamente el 40% de todos los genes anotados en el genoma, con una marcada acumulación de transcritos sentido y antisentido que proceden de regiones que no se expresan en condiciones fisiológicas. Además, los resultados sugieren que los transcritos antisentido son potencialmente traducibles, ya que la inserción de un transgén eYFP en un locus que no se expresa en condiciones normales, proporciona una señal de fluorescencia detectable en ausencia de RBP33. Por otro lado, la pérdida de la proteína no produce un aumento apreciable en la accesibilidad de la cromatina, por lo que RBP33 no parece actuar a este nivel. Finalmente, los datos muestran que los transcritos regulados por RBP33 son significativamente más estables en tripanosomas cuando se silencia la expresión de RBP33 y que el complejo exosoma es responsable de su degradación. Estas observaciones nos permiten plantear un modelo donde RBP33 actúa guiando a los transcritos aberrantes para su degradación vía exosoma, amortiguando en consecuencia la transcripción no productiva en los tripanosomas, aunque el mecanismo exacto queda aún por determinar.
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