Evaluación de la integridad y funcionalidad espermática post-descongelación del caballo criollo colombiano mediante el uso de antioxidantes y un inhibidor de la capacitación

• Autores: Mariano Eliécer Acosta Lobo
• Directores de la Tesis: Benjamín Alberto Rojano (dir. tes.), Giovanni Restrepo Betancur (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Nacional de Colombia (UNAL) ( Colombia ) en 2021
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Evaluation of post-thaw sperm integrity and functionality of the Colombian Creole horse through the use of antioxidants and a capacitation inhibitor
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
  • Ciencias de la vida
    • Biología animal (zoología)
    • Biomatemáticas
    • Biometría
    • Biofísica
    • Biología celular
    • Etología
    • Genética
    • Biología humana
    • Biología de insectos (entomología)
    • Microbiología
    • Biología molecular
    • Biología vegetal (botánica)
    • Radiobiología
    • Simbiosis
    • Virología
    • Otras especialidades biológicas
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: repositorio.unal.edu.co
• Resumen

  • La criopreservación de semen equino facilita su uso en programas de inseminación artificial y mejoramiento genético, independientemente de la ubicación, disponibilidad o estado del ejemplar equino. Adicionalmente, su uso se ha extendido al desarrollo de biotecnologías de la reproducción asistida y a procesos de producción de embriones tanto in vivo como in vitro. Sin embargo, con el semen criopreservado se han conseguido tasas más bajas de fertilidad comparadas con las obtenidas con semen refrigerado. A nivel mundial se llevan a cabos múltiples estudios enfocados a mejorar los procesos de congelación del semen equino y a encontrar sustancias que atenúen los daños producidos por el estrés oxidativo y el choque osmótico ocasionados por este proceso. Precisamente, para contribuir al conocimiento sobre moléculas que disminuyan el estrés de la célula espermática durante el proceso de congelación, disminuyendo el daño a su estructura, maquinaria molecular y fisiología, en este trabajo evaluamos el efecto de dos antioxidantes no enzimáticos, Quercetina (Q) y L-Ergotioneína (E) y un inhibidor de la PKA (H89), adicionados al diluyente de congelación seminal, sobre la integridad y funcionalidad espermática. Con este fin, en la posdescongelación, en la primera parte del estudio evaluamos la cinemática espermática, la integridad de membrana, y la capacidad de fertilización in vitro. Posteriormente, en la segunda parte se evaluó el estrés oxidativo y en la última fase se evaluó la viabilidad, actividad mitocondrial y la estabilidad de la membrana celular. Se utilizó el análisis espermático computarizado (CASA), el test hiposmótico, la fertilización heteróloga in vitro, la espectroflurimetría y la citometría de flujo. En los 6 grupos experimentales evaluados (Control, Q, E, H89, H89Q, H89E), en el primer estudio se evidenció que H89 disminuye la hiperactivación y Q incrementa BCF. Sin embargo, la combinación de ambas moléculas altera patrones cinemáticos importantes para llevar a cabo la fertilización. No se observaron diferencias estadísticas significativas entre tratamientos y el control en otros patrones cinemáticos, integridad de membrana o capacidad fertilizante. En la segunda parte se encontró que todos los tratamientos, excepto el H89 disminuyeron la cantidad de especies reactivas de oxígeno en el semen criopreservado, siendo Q el mejor tratamiento. Por otro lado, todos los tratamientos, excepto E disminuyeron la peroxidación lipídica con respecto al control, siendo mejor la combinación de H89 y Q. Aunque Q tuvo un efecto positivo en el decrecimiento de la peroxidación lipídica, su combinación con H89 mostró una reducción mayor, sugiriendo un efecto sinérgico con el H89. Por su parte, en la fase final se encontró que la combinación H89 + E tuvo una tendencia a mejorar la actividad mitocondrial alta. Sin embargo, ninguno de los seis tratamientos evaluados tuvo efecto estadístico significativo sobre la estabilidad de membrana, la viabilidad, contenido o captación de calcio y actividad mitocondrial. Con estos resultados se concluyó que la Q y E actúan como antioxidantes de manera diferencial para la protección del espermatozoide durante la criopreservación. Adicionalmente se encontró que la combinación Q y E con H89 muestra efectos contrastantes entre la cinemática y su capacidad antioxidante, alterando la primera, pero favoreciendo la segunda. Estos resultados abren una ventana de estudio en los mecanismos moleculares que pueden acompañar el sinergismo entre H89 con Q y E, explorar combinaciones de otras concentraciones de las tres moléculas y llevar a cabo estudios más extensos de las vías de señalización asociadas. (Texto tomado de la fuente)